应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求原位杂交的技术protocol
71/1返回列表
查看: 1109  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

绿草如茵

木虫 (小有名气)

[求助] 求原位杂交的技术protocol

大家好，本人最近想做植物组织切片的原位杂交，以前做过都失败了，现在还需要做，求具体的操作流程，谢谢！不胜感激！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
路漫漫其修远兮，吾将上下而求索！
1楼 2012-10-18 08:07:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.        制片
2.        制片处理：滴加50-100µL 70%的甲酰胺（用2×SSC配置），盖上盖片。
80℃处理2min, 拿出后迅速甩掉盖片。迅速依次放到-20℃预冷的梯度酒精中（70%，95%，100%酒精各5min或以上）。
3.        处理完自然干燥。
4.        配置杂交体系：
去离子甲酰胺              7.5µL
20×SSC                   1.5µL
ssDNA（鲑鱼精DNA）     1.5µL
B-DNA（封阻）           1µL
50%DS(葡聚糖)            3µL
Probe(最后关灯加)         1µL
上述体系配置完成后，瞬时离心（闭光），然后80℃变性10min。变性完后，迅速放到冰上处理5min以上。
5.        把上述体系滴加到玻片上，盖片，然后周围涂上无色指甲油保温密封。放入37℃饭盒里反应8h以上或过夜。
6.        用镊子将指甲油剥掉，将标本片浸入2×SSC的染色缸中，轻轻摇动使盖片脱落。
7.        再按照下列步骤清洗：
2×SSC   室温       5min
2×SSC   42℃       10min
2×SSC   室温       5min
1×PBS   室温       5min
离心管中加入0.5-1%抗小牛血清（用1×PBS配置）100µL，再加入1µL Fab,斡旋混匀，滴加到盖片上（滴加时标本不要太干燥），盖上盖片，37℃条件下，45min或以上。
8. 按照步骤7清洗
9.        自然闭光干燥后滴加PI，盖上盖片镜检。
赞一下 回复此楼
2楼2012-10-18 11:03:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

绿草如茵

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chenguestc at 2012-10-18 11:03:40
1.        制片
2.        制片处理：滴加50-100µL 70%的甲酰胺（用2×SSC配置），盖上盖片。
80℃处理2min, 拿出后迅速甩掉盖片。迅速依次放到-20℃预冷的梯度酒精中（70%，95%，100%酒精各5min或以上）。
3.        处理完 ...

谢谢，不胜感激！
回复此楼
路漫漫其修远兮，吾将上下而求索！
3楼2012-10-18 12:58:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

绿草如茵

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chenguestc at 2012-10-18 11:03:40
1.        制片
2.        制片处理：滴加50-100µL 70%的甲酰胺（用2×SSC配置），盖上盖片。
80℃处理2min, 拿出后迅速甩掉盖片。迅速依次放到-20℃预冷的梯度酒精中（70%，95%，100%酒精各5min或以上）。
3.        处理完 ...

“  7.5µL”请问这是什么意思？我不太理解，谢谢！
赞一下 回复此楼
路漫漫其修远兮，吾将上下而求索！
4楼2012-10-18 13:00:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

微升。
拷贝的时候乱码了。。。。。
赞一下 回复此楼
5楼2012-10-18 13:39:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

绿草如茵

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by chenguestc at 2012-10-18 13:39:29
微升。
拷贝的时候乱码了。。。。。

“Probe(最后关灯加)         1µL
你好，请问你是做的植物组织的原位杂交吗？你的探针浓度和杂交温度都是多少？B-DNA哪里买的啊？不好意思，问题太多了！不胜感激！
赞一下 回复此楼
路漫漫其修远兮，吾将上下而求索！
6楼2012-10-23 10:46:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 绿草如茵 at 2012-10-23 10:46:58
“Probe(最后关灯加)         1µL
你好，请问你是做的植物组织的原位杂交吗？你的探针浓度和杂交温度都是多少？B-DNA哪里买的啊？不好意思，问题太多了！不胜感激！...

探针浓度根据物种有所区别，麦类作物一般用几十纳克足够了就。
杂交温度为37度避光过夜。
B-DNA有时不需要，B=BLOCKING, 只有在特殊情况下需要，例如，野草和小麦杂交后，鉴定小麦背景中的野草染色体时需要将小麦DNA打断用于与自身染色体杂交即用小麦DNA封阻小麦，这样用野草的DNA杂交时就只有野草DNA有信号。
赞一下 回复此楼
7楼2012-10-24 15:42:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 绿草如茵 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿中国海洋大学，生物学，301分，求调剂 +5 1孙悟空 2026-03-17 5/250 2026-03-19 18:03 by zcl123
[考研] 0703化学调剂 ，六级已过，有科研经历 +11 曦熙兮 2026-03-15 11/550 2026-03-19 17:13 by yywzz
[考研] 【考研调剂】化学专业 281分，一志愿四川大学，诚心求调剂 +5 吃吃吃才有意义 2026-03-19 5/250 2026-03-19 16:18 by 30660438
[考研] 招收调剂硕士 +4 lidianxing 2026-03-19 10/500 2026-03-19 16:05 by 余麟余
[考研] 本人考085602 化学工程 专硕 +17 不知道叫什么！ 2026-03-15 19/950 2026-03-19 15:06 by 尽舜尧1
[考研] 085600材料与化工调剂 324分 +10 llllkkkhh 2026-03-18 12/600 2026-03-19 14:33 by llllkkkhh
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-19 3/150 2026-03-19 13:36 by houyaoxu
[考研] 材料考研调剂 +3 xwt。 2026-03-19 3/150 2026-03-19 11:22 by w沐阳w
[考研] 0703化学调剂，求各位老师收留 +10 秋有木北 2026-03-14 10/500 2026-03-19 05:52 by anny19840123
[考研] 304求调剂 +6 司空. 2026-03-18 6/300 2026-03-18 23:03 by 星空星月
[考研] 化学工程321分求调剂 +15 大米饭！ 2026-03-15 18/900 2026-03-18 14:52 by haxia
[考研] 280求调剂 +6 咕噜晓晓 2026-03-18 7/350 2026-03-18 11:25 by 无际的草原
[考研] 0703化学调剂 +3 妮妮ninicgb 2026-03-17 3/150 2026-03-18 10:29 by macy2011
[考研] 268求调剂 +6 简单点0 2026-03-17 6/300 2026-03-18 09:04 by 无际的草原
[考研] 一志愿苏州大学材料工程（085601）专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +6 大火山小火山 2026-03-16 8/400 2026-03-17 15:05 by 无懈可击111
[考研] 211本，11408一志愿中科院277分，曾在中科院自动化所实习 +6 Losir 2026-03-12 7/350 2026-03-17 12:09 by danranxie
[考研] 333求调剂 +3 文思客 2026-03-16 7/350 2026-03-16 18:21 by 文思客
[考研] 0856求调剂 +3 刘梦微 2026-03-15 3/150 2026-03-16 10:00 by houyaoxu
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油！? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
[考研] 289求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-14 6/300 2026-03-14 18:58 by userper
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭