应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求原位杂交的技术protocol
51/1返回列表
查看: 1331  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

绿草如茵

木虫 (小有名气)

[求助] 求原位杂交的技术protocol

大家好，本人最近想做植物组织切片的原位杂交，以前做过都失败了，现在还需要做，求具体的操作流程，谢谢！不胜感激！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
路漫漫其修远兮，吾将上下而求索！
1楼 2012-10-18 08:07:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

绿草如茵

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chenguestc at 2012-10-18 11:03:40
1.        制片
2.        制片处理：滴加50-100µL 70%的甲酰胺（用2×SSC配置），盖上盖片。
80℃处理2min, 拿出后迅速甩掉盖片。迅速依次放到-20℃预冷的梯度酒精中（70%，95%，100%酒精各5min或以上）。
3.        处理完 ...

谢谢，不胜感激！
回复此楼
路漫漫其修远兮，吾将上下而求索！
3楼2012-10-18 12:58:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.        制片
2.        制片处理：滴加50-100µL 70%的甲酰胺（用2×SSC配置），盖上盖片。
80℃处理2min, 拿出后迅速甩掉盖片。迅速依次放到-20℃预冷的梯度酒精中（70%，95%，100%酒精各5min或以上）。
3.        处理完自然干燥。
4.        配置杂交体系：
去离子甲酰胺              7.5µL
20×SSC                   1.5µL
ssDNA（鲑鱼精DNA）     1.5µL
B-DNA（封阻）           1µL
50%DS(葡聚糖)            3µL
Probe(最后关灯加)         1µL
上述体系配置完成后，瞬时离心（闭光），然后80℃变性10min。变性完后，迅速放到冰上处理5min以上。
5.        把上述体系滴加到玻片上，盖片，然后周围涂上无色指甲油保温密封。放入37℃饭盒里反应8h以上或过夜。
6.        用镊子将指甲油剥掉，将标本片浸入2×SSC的染色缸中，轻轻摇动使盖片脱落。
7.        再按照下列步骤清洗：
2×SSC   室温       5min
2×SSC   42℃       10min
2×SSC   室温       5min
1×PBS   室温       5min
离心管中加入0.5-1%抗小牛血清（用1×PBS配置）100µL，再加入1µL Fab,斡旋混匀，滴加到盖片上（滴加时标本不要太干燥），盖上盖片，37℃条件下，45min或以上。
8. 按照步骤7清洗
9.        自然闭光干燥后滴加PI，盖上盖片镜检。
赞一下 回复此楼
2楼2012-10-18 11:03:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

绿草如茵

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chenguestc at 2012-10-18 11:03:40
1.        制片
2.        制片处理：滴加50-100µL 70%的甲酰胺（用2×SSC配置），盖上盖片。
80℃处理2min, 拿出后迅速甩掉盖片。迅速依次放到-20℃预冷的梯度酒精中（70%，95%，100%酒精各5min或以上）。
3.        处理完 ...

“  7.5µL”请问这是什么意思？我不太理解，谢谢！
赞一下 回复此楼
路漫漫其修远兮，吾将上下而求索！
4楼2012-10-18 13:00:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

微升。
拷贝的时候乱码了。。。。。
赞一下 回复此楼
5楼2012-10-18 13:39:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +3 cqwQDCxMcL3I 2026-09-29 4/200 2026-09-30 16:52 by Z9YWQ5EAO3qp
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 cqwQDCxMcL3I 2026-09-29 4/200 2026-09-30 16:45 by Z9YWQ5EAO3qp
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 cqwQDCxMcL3I 2026-09-29 4/200 2026-09-30 16:33 by Z9YWQ5EAO3qp
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 cqwQDCxMcL3I 2026-09-29 6/300 2026-09-30 16:26 by Z9YWQ5EAO3qp
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 4/200 2026-09-29 16:47 by yCO1Ll7aHtsw
[博后之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 16:30 by etmYJ6d2rquH
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 16:03 by etmYJ6d2rquH
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 15:46 by etmYJ6d2rquH
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 4/200 2026-09-29 15:15 by etmYJ6d2rquH
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 15:04 by etmYJ6d2rquH
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 3/150 2026-09-29 14:30 by etmYJ6d2rquH
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 7/350 2026-09-29 14:07 by etmYJ6d2rquH
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 3/150 2026-09-29 13:56 by etmYJ6d2rquH
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 09:59 by JzYBbHIXWSrW
[教师之家] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 4/200 2026-09-29 09:49 by JzYBbHIXWSrW
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:42 by ZvyPK8n6Nfki
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-28 23:46 by b8fCuTHqckEt
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 3/150 2026-09-28 23:12 by b8fCuTHqckEt
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:55 by ez6fGg9abYaj
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 6/300 2026-09-28 22:15 by ez6fGg9abYaj
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭