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a-淀粉酶的酶活性测定
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| 想测定酶液的活性，自己找了一个方法测，用碘液和紫外可见分光光度计测与淀粉反应后的样液的吸光度，然后求出浓度的方法。但是还是好多疑问，这个方法貌似要先估算酶的活力再稀释的，但是拿到一瓶酶样液，该怎么估计它的活力？然后稀释多少倍去测？想问问大家是用什么方法测定的？有什么要注意的，麻烦详细点，谢谢！ |
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aloon111
金虫 (正式写手)
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- 专业: 微生物资源与分类学
2楼2012-10-15 19:56:47
3楼2012-10-15 23:25:46
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试过把酶取1ml稀释了250倍，反应5min后证明淀粉被反应完了，加入碘液没变色，但是吸光度是89%，不在文献提供的浓度-吸光度的转换表中，而且我也怀疑5min内可能早就消耗完了加入的淀粉，如果以5min来算酶活的话，应该不准了吧？我认为酶的浓度可以再稀释点，本来打算是让它在5min内不把所有的淀粉水解完，然后我就可以通过吸光度测得剩下淀粉的浓度，可以推算酶的活力的，但是我再从250中取了1ml稀释250倍，反应了5min后加入碘液，溶液变得好黑，测了吸光度是0.2%，也不在浓度-吸光度的转换表里查到，我郁闷了，很怀疑这种方法可不可行？我的酶是太稀了还是太浓了？要怎样才能测出转换表里的吸光度范围（大概30%~50%）不知道你们怎么看。。。 |
4楼2012-10-16 10:59:38
5楼2012-10-16 11:01:39
6楼2012-10-16 11:03:16
7楼2012-10-16 12:31:00