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[求助]
关于组氨酸标签 洗脱 问题
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| 如果表达的蛋白两端都有组氨酸标签的话，，洗脱时容易洗脱吗，，根只有一个组氨酸标签比，，洗脱条件要如何变化？ |
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13楼2012-10-17 20:51:18
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
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2楼2012-10-13 15:42:56
linxt2005
金虫 (小有名气)
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- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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不知楼主在表达的蛋白两端构建同一种融合标签的目的是什么？ 从纯化的角度，正如楼上所说的，可以通过一些测试来确定实验的条件，比如可以先用连续梯度（咪唑浓度0~500mM）进行洗脱， 根据实验结果再进行优化。 如果结合比较牢固的话，可以采用降低pH值的方法来洗脱，当然要考虑目标蛋白的耐受范围。 从构建的角度，理论上讲，两端带同一种亲和标签，进行亲和纯化时，会有3种情况， 1 不结合；2 一端结合；3 两端都结合。 这主要与蛋白的构象有关，同时也受实验环境比如盐浓度等的影响。 如果出发点是想让蛋白两端都结合而提高结合强度的话， 感觉效果不一定明显，而且还有可能影响蛋白的空间构型。 |
3楼2012-10-16 12:08:42
4楼2012-10-16 12:28:16