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viki_MDK

银虫 (正式写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-17 11:37:45
诱导出的蛋白分子量对不对?有没有做空载体的对照?...

分子量符合的,空载体对照没做,
11楼2012-10-17 11:44:29
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zx1984

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

表达出来蛋白,不表示蛋白一定会上柱结合,往往理论上几率小的事情在科研中出现的情况就大,你可以用变性纯化,然后复性的方法试试。
12楼2012-10-17 14:23:53
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viki_MDK

银虫 (正式写手)

引用回帖:
12楼: Originally posted by zx1984 at 2012-10-17 14:23:53
表达出来蛋白,不表示蛋白一定会上柱结合,往往理论上几率小的事情在科研中出现的情况就大,你可以用变性纯化,然后复性的方法试试。

直接把总蛋白用8M尿溶解,,然后挂住,在慢慢降低尿浓度,,最后用咪唑洗脱吗?  我怕这样复兴后蛋白不可溶。
13楼2012-10-17 20:51:18
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by viki_MDK at 2012-10-17 11:44:29
分子量符合的,空载体对照没做,...

做下空载体诱导前和IPTG诱导试试,排除诱导蛋白不是目的蛋白的可能。变性纯化后再复性是有些麻烦,有时候难容,而且复性后样品浓度稀。尽可能在native条件下做。实在不行再试变性纯化。
14楼2012-10-18 07:50:52
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吴城子

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
silicare: 金币+10, 处女贴,重新发个帖子吧 2013-10-21 08:20:12
请教各位大神,我的一个融合蛋白用的是组氨酸标签,结合镍柱很强,用500mM的咪唑都下不下来,最后只能用0.1
M的EDTA去洗脱下来,求解决是什么原因,小弟在这里先谢过了!
15楼2013-10-20 16:38:14
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