【答案】应助回帖

11楼2012-10-17 11:44:29

zx1984

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

表达出来蛋白，不表示蛋白一定会上柱结合，往往理论上几率小的事情在科研中出现的情况就大，你可以用变性纯化，然后复性的方法试试。

12楼2012-10-17 14:23:53

viki_MDK

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引用回帖:

12楼: Originally posted by zx1984 at 2012-10-17 14:23:53
表达出来蛋白，不表示蛋白一定会上柱结合，往往理论上几率小的事情在科研中出现的情况就大，你可以用变性纯化，然后复性的方法试试。

直接把总蛋白用8M尿溶解，，然后挂住，在慢慢降低尿浓度，，最后用咪唑洗脱吗？我怕这样复兴后蛋白不可溶。

13楼2012-10-17 20:51:18

cicelyzh

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【答案】应助回帖

引用回帖:

11楼: Originally posted by viki_MDK at 2012-10-17 11:44:29
分子量符合的，空载体对照没做，...

做下空载体诱导前和IPTG诱导试试，排除诱导蛋白不是目的蛋白的可能。变性纯化后再复性是有些麻烦，有时候难容，而且复性后样品浓度稀。尽可能在native条件下做。实在不行再试变性纯化。

14楼2012-10-18 07:50:52

吴城子

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【答案】应助回帖

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silicare: 金币+10, 处女贴，重新发个帖子吧 2013-10-21 08:20:12

请教各位大神，我的一个融合蛋白用的是组氨酸标签，结合镍柱很强，用500mM的咪唑都下不下来，最后只能用0.1
M的EDTA去洗脱下来，求解决是什么原因，小弟在这里先谢过了！

15楼2013-10-20 16:38:14