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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » Fosmid文库大片段的阳性克隆子筛选和测序问题
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handsome1984

铁虫 (小有名气)

[求助] Fosmid文库大片段的阳性克隆子筛选和测序问题

大家好，有人构建过Fosmid大片段约40Kb左右的基因组文库吗？筛选阳性克隆可以用特异性引物PCR筛选吗？另外测序是怎么测呢？是提取质粒DNA直接测？片段太大了，好像测不了啊。
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1楼 2012-10-13 14:31:56
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jinpeng_6118

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 小白的桥段 at 2012-11-16 10:43:19
你建了十几个文库啦，求指导哇，我建了俩，平板涂布后菌株都不长的，到底怎么回事呢？我想如果连接有问题总该长个阴性克隆的啊，我推测包装出问题，可是又想不通什么问题，按照说明做的。
请指教，谢谢。...

你提取的DNA质量很重要的，片段尽量大，且尽量去除里面的腐殖酸杂质，提DNA的试剂盒买好点的，提完之后DNA进行乙醇沉淀一次（进一步洗脱杂质和浓缩DNA），操作过程注意些
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人生百态原为海，看破红尘方为岸！
7楼2012-11-16 19:15:30
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药剂缘分天空

新虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
scelab: 应助指数-1, 应助指数 -1.禁止恶意应助 2012-10-13 15:51:27
不管怎样，抢个沙发。。。。。。
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2楼2012-10-13 15:44:45
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hippo_li

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你所谓的阳性克隆是指什么呢？是指含有你目的基因片段的克隆？如果是，那当然可以用目的基因的特异性引物进行筛选。
这个测序不是用常规引物测序的，要用类似测基因组序列的测序方法，例如鸟枪法或者454等。你跟测序公司联系，他们会告诉你，一般送要测序的克隆的菌液就可以。
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3楼2012-10-14 19:29:45
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jinpeng_6118

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我就做宏基因组学的，构建过十几个Fosmid文库吧
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人生百态原为海，看破红尘方为岸！
4楼2012-10-15 18:44:02
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