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汕头大学海洋科学接受调剂
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handsome1984

铁虫 (小有名气)

[求助] Fosmid文库大片段的阳性克隆子筛选和测序问题

大家好,有人构建过Fosmid大片段约40Kb左右的基因组文库吗?筛选阳性克隆可以用特异性引物PCR筛选吗?另外测序是怎么测呢?是提取质粒DNA直接测?片段太大了,好像测不了啊。
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jinpeng_6118

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

筛到阳性克隆后还要进一步构建亚克隆文库,再去测序
人生百态原为海,看破红尘方为岸!
5楼2012-10-15 18:44:57
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查看全部 19 个回答

药剂缘分天空

新虫 (小有名气)

感谢参与,应助指数 +1
scelab: 应助指数-1, 应助指数 -1.禁止恶意应助 2012-10-13 15:51:27
不管怎样,抢个沙发。。。。。。
2楼2012-10-13 15:44:45
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hippo_li

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你所谓的阳性克隆是指什么呢?是指含有你目的基因片段的克隆?如果是,那当然可以用目的基因的特异性引物进行筛选。
这个测序不是用常规引物测序的,要用类似测基因组序列的测序方法,例如鸟枪法或者454等。你跟测序公司联系,他们会告诉你,一般送要测序的克隆的菌液就可以。
3楼2012-10-14 19:29:45
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jinpeng_6118

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我就做宏基因组学的,构建过十几个Fosmid文库吧
人生百态原为海,看破红尘方为岸!
4楼2012-10-15 18:44:02
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