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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 纯化金属蛋白酶时加了些EDTA，纯化好后如何除去
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bububear0806

木虫 (小有名气)

[求助] 纯化金属蛋白酶时加了些EDTA，纯化好后如何除去

纯化一种金属蛋白酶，为了防止降解加了一些EDTA，纯化好后得除去，用超滤可以除去吗？EDTA会不会螯合在蛋白上下不来而影响蛋白活性？
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1楼 2012-10-09 21:18:54
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bububear0806

木虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by MaoNaiJi at 2012-10-10 00:34:39
最简单的是透析带透析

是透析简单还是浓缩管离心简单？这样真的可以除去吗？EDTA会不会螯合在蛋白的金属上下不来呢？谢谢~~
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3楼2012-10-10 08:23:57
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bububear0806

木虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by dshlove at 2012-10-10 10:28:05
蛋白中没有金属离子的吧。再说了，蛋白石一个多级结构的，就算有，也不会是裸露的金属离子吧。个人见解...

有金属蛋白酶，蛋白中会有金属离子存在，不算裸露，但是有腔道可以接触到蛋白内的金属离子，所以不算安全~~EDTA螯合了金属离子后是就一直螯合着了吗？会解离吗？
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5楼2012-10-10 17:20:50
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bububear0806

木虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by zxc6884 at 2012-10-10 19:01:35
一般金属酶加EDTA后就会把金属离子螯合，金属离子就不再与蛋白结合，透析或多次超滤可以把EDTA和金属离子去除。如果酶的活性与金属离子有关，失去金属离子的酶就没有了活性。

明白了，谢谢~~
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8楼2012-10-11 08:42:06
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bububear0806

木虫 (小有名气)
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7楼: Originally posted by dshlove at 2012-10-10 21:25:59
嗯，螯合了基本很难解离的。...

明白了，谢谢~~
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9楼2012-10-11 08:42:19
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bububear0806

木虫 (小有名气)
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10楼: Originally posted by MaoNaiJi at 2012-10-12 01:12:38
感觉生化基础知识不牢固的人太多了...zxc6884是正解
你纯化金属酶为什么要加EDTA？EDTA是螯合金属离子的 这样酶就不带金属离子了 有可能影响甚至丧失活性

因为这个金属蛋白酶比较容易降解，所以想加少量EDTA抑制菌液中的金属蛋白水解酶，一直以为EDTA通过超滤出去的时候不会带着金属离子一起离开的，所以才加入的~~
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11楼2012-10-12 08:44:59
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