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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于Real-time RT-PCR原理、操作过程及应用
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清新百合3

金虫 (正式写手)

[求助] 关于Real-time RT-PCR原理、操作过程及应用

本人在做一个关于Real-time RT-PCR的实验

在网上查了一下Real-time RT-PCR的原理 操作过程以及应用

但都不是说得很详细

所以 能不能请各位虫友知道的告知一下

ps：一定要是标准的解释啊

谢谢了
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心如止水
1楼 2012-10-09 16:39:29
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yanzimeng1

金虫 (小有名气)
这个问题太大了，答案要很长的。而且有不同的方法，才能针对性的有相应的操作要点。否则没办法讲啊。
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2楼2012-10-19 21:34:43
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清新百合3

金虫 (正式写手)
恩 问下您
您做DNA或者蛋白质电泳时用的材料是聚丙烯酰胺吗？
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心如止水
3楼2012-10-19 23:05:27
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清新百合3

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yanzimeng1 at 2012-10-19 21:34:43
这个问题太大了，答案要很长的。而且有不同的方法，才能针对性的有相应的操作要点。否则没办法讲啊。

恩 问下您
您做DNA或者蛋白质电泳时用的材料是聚丙烯酰胺吗？
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心如止水
4楼2012-10-20 11:59:23
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yanzimeng1

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你做RT-PCR，应该是跑完PCR，然后跑胶的吧？应该是DNA么，跟蛋白什么关系呢？跑DNA用的是琼脂糖啊。
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5楼2012-10-20 17:57:53
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清新百合3

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yanzimeng1 at 2012-10-20 17:57:53
你做RT-PCR，应该是跑完PCR，然后跑胶的吧？应该是DNA么，跟蛋白什么关系呢？跑DNA用的是琼脂糖啊。

额 我是顺道问下
因为跑胶的材料是聚丙烯酰胺
它既可以用于DNA也可以用于蛋白质

额 看来 你跑胶用的是琼脂糖啊

我以为你用的是聚丙烯酰胺的  

若你也用这个  那我就可以问下关于对聚丙烯酰胺的处理了

因为聚丙烯酰胺在液体状态下是有剧毒的
可能致癌
我是想问下 万一不小心弄到了 怎么处理
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心如止水
6楼2012-10-20 19:50:56
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yanzimeng1

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
silicare: 金币+10, BioEPI+1, 应助指数+1, 谢谢参与 2013-03-14 09:37:23
大侠，我知道聚丙烯酰胺胶可以跑DNA也可以跑蛋白。可是一般情况下，如果你是做RT-PCR的话，好像都是用琼脂糖跑的，还没听说用聚丙烯酰胺跑的。后者如果用于DNA，通常都是用来跑分子标记的。而且如果你用来做REAL-TIME ，目的不就是想定量的么，用跑胶的技术，这个误差很大。现在基本都不做这个了，用的也都是荧光定量PCR仪器啊。反过来说，如果没有仪器，用跑胶的话，你跑琼脂胶的效果才好，能够调节每次加样的量啊，如果用聚丙烯酰胺，出来的结果更不可信了，后者用来定性还可以，定量恐怕不行吧。
还有做分子实验么，难免接触有毒的东西，小心点做好防护措施就是，没其他的方法。注意保护自己，命最重要。
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7楼2012-10-20 21:17:30
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清新百合3

金虫 (正式写手)
★
silicare: 金币+1, 不吃不喝不用手摸就没问题 2013-03-14 09:39:37
引用回帖:
7楼: Originally posted by yanzimeng1 at 2012-10-20 21:17:30
大侠，我知道聚丙烯酰胺胶可以跑DNA也可以跑蛋白。可是一般情况下，如果你是做RT-PCR的话，好像都是用琼脂糖跑的，还没听说用聚丙烯酰胺跑的。后者如果用于DNA，通常都是用来跑分子标记的。而且如果你用来做REAL-TI ...

大哥
偶是女生
听说那个跑胶的缓冲液会造成女性不育
是不 ？

偶好害怕
现在还没有结婚
更别提生孩子了
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心如止水
8楼2012-10-20 21:43:40
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yanzimeng1

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
silicare: 金币+3, 应助指数+1, 在理 2013-03-14 09:39:52
MM，我是JJ. 我说了，做分子实验的，没有不接触有毒的东西。关键是养成良好的习惯，你要做其他方面的实验也都有毒。想完全避开，不可能。很多都是女同胞，不照样结婚生子？没你想想的那么严重，注意安全，但也不至于危言耸听。保重吧。
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9楼2012-10-20 22:07:31
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清新百合3

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by yanzimeng1 at 2012-10-20 22:07:31
MM，我是JJ. 我说了，做分子实验的，没有不接触有毒的东西。关键是养成良好的习惯，你要做其他方面的实验也都有毒。想完全避开，不可能。很多都是女同胞，不照样结婚生子？没你想想的那么严重，注意安全，但也不至于 ...

不是 我听我本科的一个老师说
他的导师的孩子 在15岁的时候 莫名其妙的死在家中了
然后死因不明
猜想 可能是分子实验做多了
人体产生突变
然后影响了下一代
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心如止水
10楼2012-10-20 22:25:55
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