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wei_suzhen新虫 (小有名气)
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[求助]
如何克隆一段1200bp的真核基因，序列来自NCBI
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| 想从黑曲霉中提取一种酶的基因，从NCBI已查找到所需基因的序列，但是宿主菌株与我们的不同。因此想通过已查到的基因序列设计引物，来PCR从我们菌株提取的DNA，进而检测我们的菌株是不是也产这种酶。这段基因序列长度是1257bp,含有两个内含子区,而且这段序列内部含有我们所加的酶切位点。通过软件primer primer5设计的引物都不是从两端开始的，现在不知道怎样设计引物来克隆这段序列的全长？？ |
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8楼2013-03-05 18:24:09
2楼2012-10-07 13:04:02
【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-07 17:25:47
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小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-07 17:25:47
| 个人感觉没必要P那么长，只是验证一下有没有这个基因可以设计一下引物P个五六百bp就可以了，所以引物没从两头开始也没关系的，另外用酶切位点的话应该不可以与其本身含的酶切位点相同，最好换一下酶切位点，要想p全长的话可以再两端各取20bp让后加上酶切位点和保护碱基，个人见解，希望对你有所帮助 |
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wei_suzhen3楼2012-10-07 15:15:22
wei_suzhen
新虫 (小有名气)
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4楼2012-10-07 20:44:14