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逆转录-pcr图,就解
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最近在做反转录-PCR,结果是很奇怪啊,因此上传图片求高人指导: 首先我的RNA是从细胞里提出来的。 现在是做了反转录,并做了PCR ,跑胶结果让我很郁闷。 反转录的体系是: DEPC水:1微升 total RAN :10微升(在小皿里种的细胞,浓度低,总量为0.98微克) oligodT:1微升(1微克) dNTPs:2微升 PCR仪,70度,10分钟,后冰浴10MINS. 然后离心,后加入5*AMV酶buffer :4微 RNasin:1微 AMV:1微 混匀,PCR 仪,42度,60mins;95度,10mins。 然后做PCR. 体系: 2*PCR mix 10微 上游引物:1微(10微摩/升) 下游引物:1微(10微摩/升) cDNA:1微 超纯水补足到20微。 T=95度,3mins T=94度,1min T=58度,1min T=72度,4mins, 35个cycle。 结果如图: |
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2012-09-26 19:16:45, 1.53 M
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