10楼: Originally posted by 494750284 at 2012-09-27 20:25:23
额，如果RNA正常。那就排除一个原因。
那这样吧，你用你反转的cDNA为模板，用你已有的确定的引物P一下其他目的基因。比如你现在P大鼠的GAPDH没P出来，没办法确定是反转体系有问题还是引物有问题，那用你确定能P出来 ...

12楼: Originally posted by 494750284 at 2012-09-27 21:50:43
如果这样的话，果断的换引物，如果你已经做了梯度还是没出来，说明引物质量很差。比较省事儿的方法是去文献找现成的，自己验证一下。自己设计的话就一次多设计几个，多花一二百引物钱，但是可能会节约时间

13楼: Originally posted by wxd729 at 2012-09-28 05:53:15
1.首先你用核酸液直接跑胶一下，证实一下你提取的核酸液的纯度和3个片段的情况。2. 用oligodt为引物只能反转有poly-A的RNA，一般情况下只要有核酸存在都能扩增的出来。

14楼: Originally posted by xingfuxiaoyu at 2012-09-29 10:26:04
我做了退火温度梯度，也做了模板浓度梯度，可还是出不来啊，我急死了...

16楼: Originally posted by 494750284 at 2012-09-29 13:44:53
我不是让你摸索反应条件，这可能是你的引物根本就不行。引物不合格很正常啊，你为啥那么确定你设计的引物没问题呢？文献报道？...

17楼: Originally posted by baby1987 at 2012-09-29 15:31:29
换个以前可以p出来的引物试试，如果还p不出来，可能就是反转录出问题了。