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weining1203

新虫 (小有名气)

[求助] 最近做的菌落pcr,可以做胶回收吗? 已有1人参与

如标题,最近跑的菌落pcr,1-3有拖尾和弥散,但是目的带很亮,产生这种现象的原因是什么啊,杂质比较多吗;4和5的模板是DNA,不是菌落,目的带比较弱,小弟想问一下1-3可不可做胶回收然后连T载体做克隆啊,还要优化pcr条件吗?

eric 2012-09-25 21hr 01min1.jpg
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weining1203

新虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
16楼: Originally posted by sxxuan at 2012-09-27 09:29:48
菌液的背景不纯因为太多杂质了。如果可以的话提取菌的DNA再去做扩增,可能会好一点。在因为两端直接设计酶切位点就可以了。
如果条带那么强,可以直接割胶回收的。如果懒得重新设计引物,可以看看现成的T载体里有没 ...

谢谢  回收效果还不错
23楼2012-10-16 19:40:29
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wu_shiyong

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
菌液PCR这种情况正常,可以切胶回收后接着做克隆!
低调稳重务实内敛---------------残
2楼2012-09-26 09:44:39
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
菌落PCR杂质多,不建议回收做克隆。做连用不了多少DNA的,回收多了也没用,一般50ul的PCR产物足以。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2012-09-26 09:48:18
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weining1203

新虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-09-26 09:48:18
菌落PCR杂质多,不建议回收做克隆。做连用不了多少DNA的,回收多了也没用,一般50ul的PCR产物足以。

谢谢回复,您好楼上的说的相反,有点迷茫啊
4楼2012-09-26 10:11:30
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