24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 387  |  回复: 3

cm_1101

新虫 (初入文坛)


[交流] 弄不明白原因

请教各位老师:本人之前做了一个PET32载体表达,先挑一个单克隆在1ml带Amp的LB ,37°摇18h,第二天按(1;30)接种之5ml带Amp的LB中,先再37°摇3个半小时,然后在25°加IPTG的使用的浓度为0.25mmol/ml,诱导6个半小时。通过用12%SDS-PAGE能看见表达的目的带,而且很清楚。之后重新把接种体积从5ml变成500ml用相同的条件做实验。但从12%SDS-PAGE却不能看见表达的目的带,请问这是什么原因?急急急!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

houchm0927

金虫 (小有名气)



cm_1101(金币+1): 谢谢参与
蛋白在上清还是在沉淀里?如果相同的诱导条件下连沉淀里都没你的目的蛋白,那就说明你的宿主菌有问题了。
2楼2012-09-24 19:44:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

junminh

铜虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小量放大条件优化下,既然小量都能表达,说明整个体系是应该是没有问题的,条件摸索下。
3楼2012-09-25 10:03:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)


★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-25 14:35:54
做诱导表达不仅和IPTG浓度,诱导时间,收菌时候的OD有关。看你的情况,扩大培养后由于液体表面积/菌液体积不同了,即使摇菌速度一样,菌生长的状态会不同,表达效果当然不一样。如果是想扩大培养,最好是在原来的条件基础上优化一下条件。比如IPTG浓度,诱导时间(取少量样品并记录OD)。
4楼2012-09-25 12:26:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 cm_1101 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料科学与工程求调剂 +13 深V宿舍吧 2026-03-29 13/650 2026-03-31 19:50 by Dyhoer
[考研] 复试调剂 +7 双马尾痞老板2 2026-03-31 7/350 2026-03-31 19:49 by Dyhoer
[考研] 0710生物学求调剂! +5 叙述文 2026-03-31 5/250 2026-03-31 17:32 by 唐沐儿
[考研] 一志愿西交大080500材料学硕349 +5 jqx1258 2026-03-31 6/300 2026-03-31 16:16 by 记事本2026
[考研] 化学工程085602 305分求调剂 +28 RichLi_ 2026-03-25 36/1800 2026-03-31 14:56 by JourneyLucky
[考研] 本科211安全工程,初试290分,求调剂 +3 2719846834 2026-03-28 3/150 2026-03-31 13:52 by 热情沙漠
[考研] 270求调剂 +3 小杰pp 2026-03-31 4/200 2026-03-31 12:59 by wxiongid
[考研] 313求调剂 +6 卖个关子吧 2026-03-31 6/300 2026-03-31 10:58 by Jaylen.
[考研] 070300化学279求调剂 +7 哈哈哈^_^ 2026-03-31 9/450 2026-03-31 10:02 by cal0306
[考研] 0703本科郑州大学求调剂 +7 nhj_ 2026-03-25 7/350 2026-03-30 12:44 by fangnagu
[考研] 299求调剂 +10 15188958825 2026-03-25 10/500 2026-03-29 17:51 by 王亮_大连医科大
[考研] 070305高分子化学与物理 304分求调剂 +12 c297914 2026-03-28 12/600 2026-03-29 16:21 by Serene1974
[考研] 279求调剂 +4 蝶舞轻绕 2026-03-29 4/200 2026-03-29 09:45 by laoshidan
[考研] 求调剂 +7 争取九点睡 2026-03-28 8/400 2026-03-28 21:07 by 争取九点睡
[考研] 070300求调剂306分 +4 26要上岸 2026-03-27 4/200 2026-03-28 13:06 by 唐沐儿
[考研] 286求调剂 +12 PolarBear11 2026-03-26 12/600 2026-03-28 12:14 by zllcz
[考研] 285求调剂 +4 AZMK 2026-03-27 7/350 2026-03-27 20:59 by AZMK
[考研] 348求调剂 +4 小懒虫不懒了 2026-03-27 5/250 2026-03-27 12:47 by 果果妈咪
[考研] 考研一志愿苏州大学初始315(英一)求调剂 +3 sbdksD 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:16 by xcjcqu
[考研] 296求调剂 +4 汪!?! 2026-03-25 7/350 2026-03-25 16:41 by 汪!?!
信息提示
请填处理意见