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lixin1292006

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[交流] 求助分析凝胶色谱图！谢谢！

自己刚做的凝胶色谱图，求分析！
色谱条件：昆虫抗菌肽（昆虫血淋巴，加热处理，除去大分子蛋白等杂质）
               sephadex G-50
               柱1cm*40cm
               流动相：水
               流速：3ml/min
               检测波长：280nm
从图中看应该是物质没有很好的分离，请教大家如何改进条件，使分离的更好些！谢谢！

akldj.jpg

aljdk.jpg

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1楼 2012-09-22 09:06:20

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xx小小xx

版主

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
lixin1292006: 金币+10 2012-09-22 13:21:27

楼主介绍一下昆虫抗菌肽是神马东东啊，没化学式很难分析的

就你提供的信息看，你的色谱条件有两个大问题：1、流动相不能用纯水。多肽类物质与蛋白质一样都是聚电解质，做GPC必须在流动相里面加支持电解质，一般是氯化钾或者硝酸钠。具体要查相关文献，因为与色谱柱的填料性质，已经试样性质有关。通常还要加缓冲液条件pH。2、流速太快。一般8mm直接的柱子流速用0.5~1mL/min，10mm的一般不应该超过1.5mL/min。而且你用的是葡聚糖凝胶，机械强度很低，更应该用较低的流速，否则会压坏柱床。

另外，多肽分子量一般很小，应该用小孔径的填料，你选择的色谱柱是否合适要咨询一下生产商

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