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vera0610

新虫 (初入文坛)

[求助] 液相色谱分不开~~~~~~~~求助啊~~~~~~~~~~

我的物质是多个磺酸钠取代的间苯二酚,有二取代和三取代
我自己建立的分析方法是:流动相为水(Na2SO4=0.1mol/L):甲醇:乙腈=86:10:4
流速0.5ml/min 柱温30℃ 样品浓度10mg/l 检测波长210nm
谱图见附件

调节流动相的配比以及调节pH都试过了,就是分不开,求助啊!!!!
我用的柱子是Agilent Zorbax SB-C18 4.6*250mm 5um
会不会是我柱子选得不好,用什么柱子更好呢?

未命名.jpg
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mikey_m

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xbqewpq: 金币+1, 感谢应助 2012-09-13 17:48:55
你用的是反相柱,分离的化合物却是极性很强的
所以保留是较弱的,优化建议如下:
1 流动相 等度的分离比梯度差,可从100%水相起,逐步过渡到中等有机相;
2 流动相优化不理想的情况下,可以考虑处理底物,如将极性基团进行处理,减弱化合物的极性后进行分析;另外就是换用其它色谱柱了,可选择用于极性化合物分离的色谱柱
2楼2012-09-12 14:57:03
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vknight

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xbqewpq: 金币+1, 感谢应助 2012-09-13 17:49:05
柱温高一点,样品浓度低一点,流动相一开始从95%的水相开始走梯度洗脱,水里边加点缓冲盐试试,最后实在不行就换柱子吧
会做饭的男人才是最帅的!!!
3楼2012-09-12 15:44:14
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guevara1967

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xbqewpq: 金币+1, 辛苦了~ 2012-09-13 17:49:35
换磷酸盐,调一下pH,单独用甲醇或乙腈试试
梦想、激情、灵感、体验--che
4楼2012-09-13 10:09:49
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vera0610

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by mikey_m at 2012-09-12 14:57:03
你用的是反相柱,分离的化合物却是极性很强的
所以保留是较弱的,优化建议如下:
1 流动相 等度的分离比梯度差,可从100%水相起,逐步过渡到中等有机相;
2 流动相优化不理想的情况下,可以考虑处理底物,如将极 ...

1.请问梯度从100%水相开始会对柱子有损伤吗?会造成柱子塌陷什么的吗?
2.磺酸基可以如何处理来降低极性呢?我有机不太好。。。
5楼2012-09-13 12:47:46
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vera0610

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by vknight at 2012-09-12 15:44:14
柱温高一点,样品浓度低一点,流动相一开始从95%的水相开始走梯度洗脱,水里边加点缓冲盐试试,最后实在不行就换柱子吧

柱温我有调过,貌似越高对分离越不利啊...
缓冲盐用磷酸二氢钠可以吗
6楼2012-09-13 12:50:30
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vera0610

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by guevara1967 at 2012-09-13 10:09:49
换磷酸盐,调一下pH,单独用甲醇或乙腈试试

我在Na2SO4缓冲溶液中加过磷酸调pH,调过3.5和2.5的,效果都不理想,磷酸盐我没试过,可以试试看,请问pH调在一个什么范围内比较合适呢?
7楼2012-09-13 12:54:28
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guevara1967

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
soundhorizo: 金币+2, 鼓励交流 ^^ 2012-09-14 07:41:03
Na2SO4溶液在HPLC里很少用,强酸强碱盐,没什么缓冲能力,缓冲磷酸氢二甲钾
梦想、激情、灵感、体验--che
8楼2012-09-13 15:38:25
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songpingzz

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
soundhorizo: 金币+1, 感谢应助 ^^ 2012-09-14 07:41:18
最好不用纯水,会伤柱子的。由于极性较强,所以用乙醇开始逐步加水梯度洗脱就行
9楼2012-09-14 06:42:07
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mikey_m

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by vera0610 at 2012-09-13 12:47:46
1.请问梯度从100%水相开始会对柱子有损伤吗?会造成柱子塌陷什么的吗?
2.磺酸基可以如何处理来降低极性呢?我有机不太好。。。...

不是长时间的走水相是没事的

磺酸基的极性具体如何操作,我自己倒没做过
但一般的方法有酯化  我觉得是可以考虑的
10楼2012-09-14 08:50:13
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