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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 实验室分析、仪器 » 凝胶过滤层析中遇到的问题，求解
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wangchao_207

金虫 (小有名气)

[求助] 凝胶过滤层析中遇到的问题，求解

蛋白质浓度很低，想要通过凝胶过滤层析分离纯化目的蛋白，是不是这种浓度太低的蛋白基本上没有分离效果啊？？求解，谢谢
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加油吧奋斗吧
1楼 2012-09-11 11:06:03
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

herizonyan

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
lovibond: 金币+1, 鼓励新虫发帖 2012-09-12 08:28:16
浓度低的话就先浓缩一下再做分离吧~
虽然说应该是跟浓度关系不太大的。
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3楼2012-09-11 22:19:13
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396101466

金虫 (正式写手)

一段遗失的美好

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
树树8013: 回帖置顶 2012-09-13 21:42:37
树树8013: 金币+2, 谢谢解答，请继续关注咱们食品人自己的食品板块。 2012-09-13 21:42:59
看了别人的回复我想说明以下几个问题：
第一，对于一个固定的凝胶柱来说，上样体积是一定的，如果蛋白质浓度较低，那么该柱子的分离效率就比较低，所以就要求上样前对样品进行浓缩，来提高柱子的效率，要不然就费时间，费力气，最终得到的效果还不好！
第二，蛋白质浓度的测定有很多方式，最简单的方式就是用蛋白微量检测仪进行测定，这样可以直接得到结果，如果没有这样的仪器，只有用其他的检测方法了。如试剂盒检测：BCA法测蛋白浓度，Bradford法，Lowry法等等，这些都有标准的操作方法的！
希望对你有用！
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人生的三大悲剧：不知道选择，不坚持选择，不断选择！
7楼2012-09-12 12:07:21
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396101466

金虫 (正式写手)

一段遗失的美好

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 396101466 at 2012-09-12 12:07:21
看了别人的回复我想说明以下几个问题：
第一，对于一个固定的凝胶柱来说，上样体积是一定的，如果蛋白质浓度较低，那么该柱子的分离效率就比较低，所以就要求上样前对样品进行浓缩，来提高柱子的效率，要不然就费时 ...

对了，还忘记了一个问题，浓缩的方式有很多，保留生物活性的可以用一定截留分子量的透析袋透析，或者是用超滤管离心浓缩，这些是我们常用的.........
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人生的三大悲剧：不知道选择，不坚持选择，不断选择！
8楼2012-09-12 12:09:50
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普通回帖

vvsober

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
lovibond: 金币+1, 鼓励应助 2012-09-12 08:28:03
凝胶层析是分子筛作用哇。和分子量有关系，但和浓度有什么关系。。只不过浓度太低的话，收集到的物质就更稀了，不好检测到了吧。。
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选择出色
2楼2012-09-11 20:20:25
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wangchao_207

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by herizonyan at 2012-09-11 22:19:13
浓度低的话就先浓缩一下再做分离吧~
虽然说应该是跟浓度关系不太大的。

恩，用什么方法浓缩呢？因为我的目的蛋白还得保持活性
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加油吧奋斗吧
4楼2012-09-12 07:57:06
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wangchao_207

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by vvsober at 2012-09-11 20:20:25
凝胶层析是分子筛作用哇。和分子量有关系，但和浓度有什么关系。。只不过浓度太低的话，收集到的物质就更稀了，不好检测到了吧。。

是啊，看文献上最好浓缩一下
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加油吧奋斗吧
5楼2012-09-12 07:57:30
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herizonyan

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by wangchao_207 at 2012-09-12 07:57:30
是啊，看文献上最好浓缩一下...

我一般是用真空旋转蒸发仪，可以保持温度低于100度。
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6楼2012-09-12 09:27:14
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wangchao_207

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 396101466 at 2012-09-12 12:07:21
看了别人的回复我想说明以下几个问题：
第一，对于一个固定的凝胶柱来说，上样体积是一定的，如果蛋白质浓度较低，那么该柱子的分离效率就比较低，所以就要求上样前对样品进行浓缩，来提高柱子的效率，要不然就费时 ...

谢谢
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加油吧奋斗吧
9楼2012-09-13 08:51:35
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wangchao_207

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 396101466 at 2012-09-12 12:09:50
对了，还忘记了一个问题，浓缩的方式有很多，保留生物活性的可以用一定截留分子量的透析袋透析，或者是用超滤管离心浓缩，这些是我们常用的............

好的，我用透析袋试过，效果不理想，我这次用超滤试试吧，谢谢
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加油吧奋斗吧
10楼2012-09-13 08:52:27
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