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yy054120012

铁虫 (初入文坛)

[求助] 用triton x-100都分不开的蛋白

想请教各位童鞋。我做天然产物分离纯化,有几个蛋白杂在一起的复合物。在文库里都克隆了相关基因。我用加了triton x-100的缓冲buffer来过分子筛都无法将他们分开,怎么办呢?之前还用较高浓度的triton x-100处理过蛋白。但就是打不开他们的分子间作用。过下来的还是杂在一起。不知道有没有其他办法。
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ilxly

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以加适当SDS到buffer里面,0.5%-1%左右对蛋白不会变性
3楼2012-09-10 12:02:35
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查看全部 5 个回答

reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以试试Tricin SDS-PAGE看看
2楼2012-09-09 19:58:43
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yy054120012

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by ilxly at 2012-09-10 12:02:35
可以加适当SDS到buffer里面,0.5%-1%左右对蛋白不会变性

我也想到这点了。但是我用0.15%预处理样品。怎么都有絮状沉淀了?无比郁闷
4楼2012-09-12 21:31:11
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yy054120012

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by reallpf at 2012-09-09 19:58:43
可以试试Tricin SDS-PAGE看看

你好, 呵呵,是这样的。我现在需要大量的获取蛋白,而不是鉴定。所以用电泳的方法没办法做。呵呵。
5楼2012-09-12 21:35:34
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