24小时热门版块排行榜    

查看: 1148  |  回复: 19
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

crystallynn

新虫 (初入文坛)

[求助] 巢式PCR

用8f/1492r  和  L1401/U968   两对引物进行巢式PCR.
第一轮产物用琼脂糖检测有条带,阴性对照无条带。
第二轮产物检测也有目的条带,但是阴性对照也有相应大小的条带。把水,引物,MIX都更换了,一样的结果。求解释啊。。~~~~谢谢~
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

crystallynn

新虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
13楼: Originally posted by huguangdong at 2012-09-04 11:26:57
我以前做巢式PCR也遇见过这种问题,把所有东西换了也出现这种情况,可能有两个原因:
1 由于巢式PCR高灵敏度和高特异性,模板中稍微一点点的污染都会扩增出条带,这在加样过程中由于我们看不见的液体飞溅而导致这种 ...

嗯好的,谢谢指教。
17楼2012-09-05 21:22:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
个人觉得,应该是第二对引物特异性不好。可以把两个都测个序看。最好再换1对引物。
2楼2012-08-31 07:17:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

crystallynn

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by chenguestc at 2012-08-31 07:17:28
个人觉得,应该是第二对引物特异性不好。可以把两个都测个序看。最好再换1对引物。

今天只用第对引物做了一下,果然阴性还是有很暗的条带。。。看了是第二对引物的问题。怎么对引物测序啊?谢谢
3楼2012-08-31 11:55:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-09-05 13:52:15
引用回帖:
3楼: Originally posted by crystallynn at 2012-08-31 11:55:46
今天只用第对引物做了一下,果然阴性还是有很暗的条带。。。看了是第二对引物的问题。怎么对引物测序啊?谢谢...

不是对引物测序,对你的PCR产物测序。但是如果第一次PCR,阴性对照也有带就不好办了。说明你的水有问题,或者引物不特异或许在病毒或细菌中能扩增,或许灭菌不彻底?
4楼2012-08-31 14:41:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[基金申请] 长年满屏的广告,版主太不责任了。基金也等的急 +4 gltch 2026-08-12 4/200 2026-08-12 16:08 by eulota
[基金申请] filecode +13 documentary 2026-08-10 15/750 2026-08-12 15:56 by 云上清扬
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 35/1750 2026-08-12 14:38 by sdfapple719
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +4 工厂打螺丝 2026-08-08 4/200 2026-08-12 09:18 by hansi2025
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +8 Tide man 2026-08-10 9/450 2026-08-11 20:39 by beefly
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +3 majunge000 2026-08-11 4/200 2026-08-11 20:13 by lch2012
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 13/650 2026-08-11 09:49 by 家与远方
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
信息提示
请填处理意见