应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 巢式PCR
202/2返回列表上一页12
查看: 1014  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

crystallynn

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by baby1987 at 2012-09-01 13:42:04
第一轮空白是因为PCR反应条件的关系，小片段没有竞争优势，或者温度不适合引物扩增。你做阴性对照的目的是什么？

什么是小片段没有竞争优势啊？退火温度，都是实验室总结出来的，应该没有什么问题。
赞一下 回复此楼
11楼2012-09-03 22:22:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baby1987

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by crystallynn at 2012-09-03 22:22:42
什么是小片段没有竞争优势啊？退火温度，都是实验室总结出来的，应该没有什么问题。...

就是第一轮PCR退火温度还有延伸时间，都不利于短片段扩增，第二轮短片段有扩增优势啊。你的实验条件怎么可以用实验室总结出来的，个人差异还是挺大的。
赞一下 回复此楼
加油。
12楼2012-09-03 23:16:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huguangdong

至尊木虫 (职业作家)
★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励热心的虫虫 2012-09-04 13:45:28
我以前做巢式PCR也遇见过这种问题，把所有东西换了也出现这种情况，可能有两个原因：
1 由于巢式PCR高灵敏度和高特异性，模板中稍微一点点的污染都会扩增出条带，这在加样过程中由于我们看不见的液体飞溅而导致这种污染，这种就是加样时小心又小心，最好是预混所有溶液后再加样，戴手套操作。
2 你的内引物设计不够合理，本身存在很多缺陷，就会莫名其妙扩增出相应条带，这种是很难用一般理论去解释的，只能做到进一步优化引物。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

crystallynn
13楼2012-09-04 11:26:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cxb-abc

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 很好的建议哦 2012-09-05 13:52:44
crystallynn: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2012-09-17 22:50:54
个人认为不是引物的问题：
建议：1，重新换新的东西，包括DNA。
      2，第一轮和第二轮在不同操作环境下操作。
      3，每次操作前，先配体系，再稀释模板。
      4，过程中轻轻把枪头打到专用水盒中，以免污染空气。
      5，买专用枪头（里面加一层滤膜），加样不会污染枪腔。我一开始用2.5 effendof 枪5只，最后还是避免不了。你按照我说的试一试。祝好运
赞一下 回复此楼
14楼2012-09-04 17:41:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

建议第二轮退火温度升高一点，如果阴性对照还是有和目的条带同样大小的带，就都回收测序吧！
赞一下 回复此楼
持之以恒、永不放弃！
15楼2012-09-04 18:42:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

建议第二轮退火温度升高一点，如果阴性对照还是有和目的条带同样大小的带，就都回收测序吧！
赞一下 回复此楼
持之以恒、永不放弃！
16楼2012-09-04 19:00:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

crystallynn

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
13楼: Originally posted by huguangdong at 2012-09-04 11:26:57
我以前做巢式PCR也遇见过这种问题，把所有东西换了也出现这种情况，可能有两个原因：
1 由于巢式PCR高灵敏度和高特异性，模板中稍微一点点的污染都会扩增出条带，这在加样过程中由于我们看不见的液体飞溅而导致这种 ...

嗯好的，谢谢指教。
回复此楼
17楼2012-09-05 21:22:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

crystallynn

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by cxb-abc at 2012-09-04 17:41:46
个人认为不是引物的问题：
建议：1，重新换新的东西，包括DNA。
      2，第一轮和第二轮在不同操作环境下操作。
      3，每次操作前，先配体系，再稀释模板。
      4，过程中轻轻把枪头打到专用水盒中，以免 ...

嗯谢谢。
回复此楼
18楼2012-09-05 21:22:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

crystallynn

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
16楼: Originally posted by gwd0312 at 2012-09-04 19:00:15
建议第二轮退火温度升高一点，如果阴性对照还是有和目的条带同样大小的带，就都回收测序吧！

好的谢谢、
回复此楼
19楼2012-09-05 21:23:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一休great

铁虫 (初入文坛)
前辈你好，我现在的实验中也出现了相同的问题。第一轮PCR的阴性对照没有条带，再以此为模板进行第二轮PCR时就有条带了，和目的条带一样。但是在第二轮时另外做的一个不加模板的空白对照就没有条带。请问，你最后是怎么解决这个问题的
赞一下 回复此楼
奋斗
20楼2014-03-04 20:53:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 crystallynn 的主题更新
202/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 环境调剂 +3 chenhanheng 2026-03-02 3/150 2026-03-02 17:37 by houyaoxu
[考研] 一志愿华中科技大学，化学专业344分，求调剂 +3 邢xing1 2026-03-02 3/150 2026-03-02 17:32 by houyaoxu
[考研] 一志愿东北大学材料专硕328，求调剂 +3 shs1083 2026-03-02 3/150 2026-03-02 17:27 by houyaoxu
[考研] 考研复试调剂，过国家线的同学都可报名 +4 黑！在干嘛 2026-02-28 5/250 2026-03-02 16:48 by chock1337
[考研] 0856调剂 +7 刘梦微 2026-02-28 7/350 2026-03-02 14:11 by liyongv
[考研] 化工专硕348，一志愿985求调剂 +6 弗格个 2026-02-28 9/450 2026-03-02 14:09 by liyongv
[考研] 材料学硕318求调剂 +9 February_Feb 2026-03-01 9/450 2026-03-02 13:31 by njzyff
[考研] 哈工大计算机刘劼团队招生 +4 hit_aiot 2026-03-01 6/300 2026-03-02 11:53 by 一声问好
[考研] 求调剂 +3 熬夜的猫头鹰 2026-03-02 3/150 2026-03-02 11:45 by 刘兵
[考研] 284求调剂 +10 天下熯 2026-02-28 11/550 2026-03-02 11:03 by 无际的草原
[考研] 化工299分求调剂 一志愿985落榜 +5 嘻嘻(*^ω^*) 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:47 by 无际的草原
[考研] 290求调剂 +9 材料专硕调剂； 2026-02-28 11/550 2026-03-01 17:21 by sunny81
[考研] 0856材料求调剂 +4 麻辣鱿鱼 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:51 by caszguilin
[考研] 课题组接收材料类调剂研究生 +3 gaoxiaoniuma 2026-02-28 4/200 2026-03-01 14:30 by jjj三跨
[考研] 298求调剂 +9 人间唯你是清欢 2026-02-28 12/600 2026-03-01 14:23 by Ducount.Y
[考研] 寻找调剂 +4 LYidhsjabdj 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:56 by sunny81
[论文投稿] 求助coordination chemistry reviews 的写作模板 10+3 ljplijiapeng 2026-02-27 4/200 2026-03-01 09:07 by babero
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭