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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 巢式PCR
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crystallynn

新虫 (初入文坛)

[求助] 巢式PCR

用8f/1492r  和  L1401/U968   两对引物进行巢式PCR.
第一轮产物用琼脂糖检测有条带，阴性对照无条带。
第二轮产物检测也有目的条带，但是阴性对照也有相应大小的条带。把水，引物，MIX都更换了，一样的结果。求解释啊。。~~~~谢谢~
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1楼 2012-08-30 19:37:23
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baby1987

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by crystallynn at 2012-09-03 22:22:42
什么是小片段没有竞争优势啊？退火温度，都是实验室总结出来的，应该没有什么问题。...

就是第一轮PCR退火温度还有延伸时间，都不利于短片段扩增，第二轮短片段有扩增优势啊。你的实验条件怎么可以用实验室总结出来的，个人差异还是挺大的。
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加油。
12楼2012-09-03 23:16:22
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
个人觉得，应该是第二对引物特异性不好。可以把两个都测个序看。最好再换1对引物。
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2楼2012-08-31 07:17:28
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crystallynn

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chenguestc at 2012-08-31 07:17:28
个人觉得，应该是第二对引物特异性不好。可以把两个都测个序看。最好再换1对引物。

今天只用第对引物做了一下，果然阴性还是有很暗的条带。。。看了是第二对引物的问题。怎么对引物测序啊？谢谢
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3楼2012-08-31 11:55:46
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-09-05 13:52:15
引用回帖:
3楼: Originally posted by crystallynn at 2012-08-31 11:55:46
今天只用第对引物做了一下，果然阴性还是有很暗的条带。。。看了是第二对引物的问题。怎么对引物测序啊？谢谢...

不是对引物测序，对你的PCR产物测序。但是如果第一次PCR，阴性对照也有带就不好办了。说明你的水有问题，或者引物不特异或许在病毒或细菌中能扩增，或许灭菌不彻底？
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4楼2012-08-31 14:41:02
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