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巢式PCR
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用8f/1492r 和 L1401/U968 两对引物进行巢式PCR. 第一轮产物用琼脂糖检测有条带，阴性对照无条带。 第二轮产物检测也有目的条带，但是阴性对照也有相应大小的条带。把水，引物，MIX都更换了，一样的结果。求解释啊。。~~~~谢谢~ |
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huguangdong
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小丹木木: 金币+2, 鼓励热心的虫虫 2012-09-04 13:45:28
小丹木木: 金币+2, 鼓励热心的虫虫 2012-09-04 13:45:28
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我以前做巢式PCR也遇见过这种问题，把所有东西换了也出现这种情况，可能有两个原因： 1 由于巢式PCR高灵敏度和高特异性，模板中稍微一点点的污染都会扩增出条带，这在加样过程中由于我们看不见的液体飞溅而导致这种污染，这种就是加样时小心又小心，最好是预混所有溶液后再加样，戴手套操作。 2 你的内引物设计不够合理，本身存在很多缺陷，就会莫名其妙扩增出相应条带，这种是很难用一般理论去解释的，只能做到进一步优化引物。 |
crystallynn13楼2012-09-04 11:26:57
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2楼2012-08-31 07:17:28
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4楼2012-08-31 14:41:02
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