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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒提取
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lxh502976898

金虫 (小有名气)

[交流] 质粒提取 已有5人参与

为什么用试剂盒提取完质粒 做电泳没有条带啊 maker正常
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1楼 2012-08-30 11:04:20
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

生物-TJAB

新虫 (小有名气)
★
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5楼: Originally posted by lxh502976898 at 2012-08-30 17:10:05
你说的菌的量是怎么回事啊？ 我一G管是DH5a，一管是BL21 后者没有带，摇菌也浑浊，而且提取器期间该有的现象都有...

bl21不是表达性宿主吗！它不大量扩增质粒的！提的淡或提不出来很正常

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6楼2012-08-31 00:05:43
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普通回帖

gelois

金虫 (正式写手)
★ ★
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小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-09-01 15:38:27
看你是提的什么质粒了。
如果是普通的转化提质粒，有可能是提质粒过程中出现了问题，导致提质粒失败。
如果是共转化之后的提质粒，则可能是没有共转成功，假阳性。
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2楼2012-08-30 11:29:45
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lxh502976898

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gelois at 2012-08-30 11:29:45
看你是提的什么质粒了。
如果是普通的转化提质粒，有可能是提质粒过程中出现了问题，导致提质粒失败。
如果是共转化之后的提质粒，则可能是没有共转成功，假阳性。

就是保存的菌液提质粒 做酶切 拉丝及絮状沉淀都有 同时提的两个不同的菌液另外一个正常
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3楼2012-08-30 13:08:16
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xuexue1204

铜虫 (小有名气)
★
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保存的菌液还是重新涂版，挑单菌落的好。我们都是这样做的，菌的量也是有影响的。
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共同学习，共同进步，共同提高，加油！
4楼2012-08-30 13:29:47
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lxh502976898

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xuexue1204 at 2012-08-30 13:29:47
保存的菌液还是重新涂版，挑单菌落的好。我们都是这样做的，菌的量也是有影响的。

你说的菌的量是怎么回事啊？ 我一G管是DH5a，一管是BL21 后者没有带，摇菌也浑浊，而且提取器期间该有的现象都有
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5楼2012-08-30 17:10:05
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王礼鹏

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-01 15:38:41
首先就确定下是否和2楼所说的。。。。。。。如果你的菌液是保存在-80摄氏度的话，反复冻融就容易使菌的活力不好。若保存在4或-20时间久了，也会使其状态不好。
你可以试试，第一次摇到对数期时然后再按菌液和LB  1：100的比例再次摇。
还有就是你提质粒的过程中s1是否加了RNA酶，保存在4摄氏度。裂解的时候充分裂解，不能有小颗粒。最后用水洗脱孵育时间长点，用洗脱下的水再二次洗脱，这样可以提高质粒溶度。。。。祝实验顺利
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7楼2012-08-31 09:26:02
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lxh502976898

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 王礼鹏 at 2012-08-31 09:26:02
首先就确定下是否和2楼所说的。。。。。。。如果你的菌液是保存在-80摄氏度的话，反复冻融就容易使菌的活力不好。若保存在4或-20时间久了，也会使其状态不好。
你可以试试，第一次摇到对数期时然后再按菌液和LB  1 ...

这些都注意了 没有问题
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8楼2012-08-31 14:03:46
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lxh502976898

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 生物-TJAB at 2012-08-31 00:05:43
bl21不是表达性宿主吗！它不大量扩增质粒的！提的淡或提不出来很正常
...

谁和你说不能摇菌提质粒的？那你做鉴定怎么提的质粒？既然能提质粒，你不摇菌怎么保存菌种？ 你再好好确定一下 ，提质粒和他的表达载体的作用 是一回事吗
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9楼2012-08-31 14:06:41
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生物-TJAB

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by lxh502976898 at 2012-08-31 14:06:41
谁和你说不能摇菌提质粒的？那你做鉴定怎么提的质粒？既然能提质粒，你不摇菌怎么保存菌种？ 你再好好确定一下 ，提质粒和他的表达载体的作用 是一回事吗...

我没说不能提质粒啊！我只是说提的不好，鉴定都是用DH5 阿尔法啊！

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10楼2012-08-31 21:51:46
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