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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 胶体金诊断试纸T线不显色
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华俊

金虫 (小有名气)

[求助] 胶体金诊断试纸T线不显色

请求各位大侠指教：
导师给的课题是做一种吸虫的免疫胶体金诊断试纸，小妹做了，构建的是夹心法，检测抗原的，金表单抗，T线处无论用单抗还是多抗喷涂，使用抗原稀释后检测还是用阳性样本，都不显示，但是C线使用羊抗兔显示很好，不知道为什么，难道是抗体标记中失活啦，为什么C线显示很好呢？请各位指点，小妹重谢啦！
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多一份快乐少一分烦恼！
1楼2012-08-28 00:17:10
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释梦110

木虫 (著名写手)
★ ★
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2012-09-15 03:32:30
半抗原是指不含蛋白质成分的有机小分子，有免疫反应性，没有免疫原型。1、既然ES抗原免疫小鼠产生了抗体，说明此抗原有免疫原性，不是半抗原。2、我不知道你怎么确定的抗原免疫小鼠后得到的蛋白就是此抗原所对应的抗体，而按你所说的将抗原稀释后检测或者用阳性样本检测都不显色，可能是因为一、你所得到的蛋白并不是此抗原所对应的抗体（不能发生特异性反应）；二、标记的PH不对，或者其他原因，导致没有标上。其实想要C线出来很简单，关键是T线，可先不要看C线。
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对不起是一种真诚，没关系是一种风度。如果你付出了真诚，却得不到风度，那只能说明对方的无知与粗俗。
9楼2012-09-13 18:06:52
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普通回帖

beliebetray

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
华俊: 金币+1, ★有帮助, 指出了问题，但是还没帮解答，谢谢 2012-08-28 15:40:50
你的抗体效价怎样？抗原是半抗原？
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2楼2012-08-28 12:22:32
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华俊

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by beliebetray at 2012-08-28 12:22:32
你的抗体效价怎样？抗原是半抗原？

谢谢你！
抗体的效价在1:1000以上，我在建立的ELISA方法中，10微克每毫升包被效果 很好，我想这个没问题，
至于是不是半抗原我也不是很清楚，但是我标记的抗体就是用吸虫ES抗原免疫的，根据我们实验室对此ES抗原的分析，其中最小蛋白分子量为22KD，至于我所使用的抗体能捕获ES中的那个成分不是很清楚啦，师姐毕业了，也没有分析，
所以我推测，抗原不是半抗原，加入时半抗原的话，我用该如何做呢？谢谢你的指导！！！
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多一份快乐少一分烦恼！
3楼2012-08-28 15:39:22
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华俊

金虫 (小有名气)
效价是1:10000以上
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多一份快乐少一分烦恼！
4楼2012-08-28 15:43:00
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beliebetray

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
华俊: 金币+4, ★★★很有帮助, 非常感谢啦！！！ 2012-08-28 23:27:56
你的抗体是通过免疫BALB/C小鼠得到的吗？22KD的蛋白分子量太小，没有免疫原性，要偶联其他蛋白后才行，所以我觉得可能是因为你的蛋白太小了，抗体没法识别。。所以T line没有显色。
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华俊
5楼2012-08-28 16:37:01
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华俊

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by beliebetray at 2012-08-28 16:37:01
你的抗体是通过免疫BALB/C小鼠得到的吗？22KD的蛋白分子量太小，没有免疫原性，要偶联其他蛋白后才行，所以我觉得可能是因为你的蛋白太小了，抗体没法识别。。所以T line没有显色。

恩恩，太感谢啦，但是我的金标的单抗是用ES抗原免疫制备的，多抗是免疫兔子制备的，
呜呜......我干怎么办呢，怎么办呢？
谢谢大侠指点啦！！！
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多一份快乐少一分烦恼！
6楼2012-08-28 23:26:05
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beliebetray

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
华俊: 金币+1, ★有帮助, 谢谢啦 2012-08-29 21:19:20
如果你制备单抗用的是ES抗原，说明你的抗原有免疫原性啊。。。一般，如果是半抗原，免疫原用半抗原偶联KLH或BSA，包被原用半抗原偶联OVA。你在试纸条上试之前有没有先在ELISA板子上用夹心法做着试试？
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7楼2012-08-29 13:13:51
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华俊

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by beliebetray at 2012-08-29 13:13:51
如果你制备单抗用的是ES抗原，说明你的抗原有免疫原性啊。。。一般，如果是半抗原，免疫原用半抗原偶联KLH或BSA，包被原用半抗原偶联OVA。你在试纸条上试之前有没有先在ELISA板子上用夹心法做着试试？

在ELISA上建立了夹心法，效果很好，师姐的论文上也建立了夹心法，都可以，ES抗原有五个成分，其中最小的是25.5KD，最大的是44KD，纠结中...
我很郁闷的是，我将ES抗原喷涂在T线处，用缓冲液做样本，也不显色，C线显色很好
哎...
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多一份快乐少一分烦恼！
8楼2012-08-29 21:18:48
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释梦110

木虫 (著名写手)
我刚接触金标几个月，分析的不对的地方不要笑话我，多多交流
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对不起是一种真诚，没关系是一种风度。如果你付出了真诚，却得不到风度，那只能说明对方的无知与粗俗。
10楼2012-09-13 18:12:08
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