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华俊

金虫 (小有名气)

[求助] 胶体金诊断试纸T线不显色

请求各位大侠指教:
导师给的课题是做一种吸虫的免疫胶体金诊断试纸,小妹做了,构建的是夹心法,检测抗原的,金表单抗,T线处无论用单抗还是多抗喷涂,使用抗原稀释后检测还是用阳性样本,都不显示,但是C线使用羊抗兔显示很好,不知道为什么,难道是抗体标记中失活啦,为什么C线显示很好呢?请各位指点,小妹重谢啦!
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华俊

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by beliebetray at 2012-08-29 13:13:51
如果你制备单抗用的是ES抗原,说明你的抗原有免疫原性啊。。。一般,如果是半抗原,免疫原用半抗原偶联KLH或BSA,包被原用半抗原偶联OVA。你在试纸条上试之前有没有先在ELISA板子上用夹心法做着试试?

在ELISA上建立了夹心法,效果很好,师姐的论文上也建立了夹心法,都可以,ES抗原有五个成分,其中最小的是25.5KD,最大的是44KD,纠结中...
我很郁闷的是,我将ES抗原喷涂在T线处,用缓冲液做样本,也不显色,C线显色很好
哎...
多一份快乐少一分烦恼!
8楼2012-08-29 21:18:48
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beliebetray

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
华俊: 金币+1, 有帮助, 指出了问题,但是还没帮解答,谢谢 2012-08-28 15:40:50
你的抗体效价怎样?抗原是半抗原?
2楼2012-08-28 12:22:32
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华俊

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by beliebetray at 2012-08-28 12:22:32
你的抗体效价怎样?抗原是半抗原?

谢谢你!
抗体的效价在1:1000以上,我在建立的ELISA方法中,10微克每毫升包被效果 很好,我想这个没问题,
至于是不是半抗原我也不是很清楚,但是我标记的抗体就是用吸虫ES抗原免疫的,根据我们实验室对此ES抗原的分析,其中最小蛋白分子量为22KD,至于我所使用的抗体能捕获ES中的那个成分不是很清楚啦,师姐毕业了,也没有分析,
所以我推测,抗原不是半抗原,加入时半抗原的话,我用该如何做呢?谢谢你的指导!!!
多一份快乐少一分烦恼!
3楼2012-08-28 15:39:22
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华俊

金虫 (小有名气)

效价是1:10000以上
多一份快乐少一分烦恼!
4楼2012-08-28 15:43:00
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