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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 胶体金诊断试纸T线不显色
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华俊

金虫 (小有名气)

[求助] 胶体金诊断试纸T线不显色

请求各位大侠指教：
导师给的课题是做一种吸虫的免疫胶体金诊断试纸，小妹做了，构建的是夹心法，检测抗原的，金表单抗，T线处无论用单抗还是多抗喷涂，使用抗原稀释后检测还是用阳性样本，都不显示，但是C线使用羊抗兔显示很好，不知道为什么，难道是抗体标记中失活啦，为什么C线显示很好呢？请各位指点，小妹重谢啦！
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多一份快乐少一分烦恼！
1楼 2012-08-28 00:17:10
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华俊

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by beliebetray at 2012-08-29 13:13:51
如果你制备单抗用的是ES抗原，说明你的抗原有免疫原性啊。。。一般，如果是半抗原，免疫原用半抗原偶联KLH或BSA，包被原用半抗原偶联OVA。你在试纸条上试之前有没有先在ELISA板子上用夹心法做着试试？

在ELISA上建立了夹心法，效果很好，师姐的论文上也建立了夹心法，都可以，ES抗原有五个成分，其中最小的是25.5KD，最大的是44KD，纠结中...
我很郁闷的是，我将ES抗原喷涂在T线处，用缓冲液做样本，也不显色，C线显色很好
哎...
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多一份快乐少一分烦恼！
8楼2012-08-29 21:18:48
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beliebetray

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
华俊: 金币+1, ★有帮助, 指出了问题，但是还没帮解答，谢谢 2012-08-28 15:40:50
你的抗体效价怎样？抗原是半抗原？
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2楼2012-08-28 12:22:32
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华俊

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by beliebetray at 2012-08-28 12:22:32
你的抗体效价怎样？抗原是半抗原？

谢谢你！
抗体的效价在1:1000以上，我在建立的ELISA方法中，10微克每毫升包被效果 很好，我想这个没问题，
至于是不是半抗原我也不是很清楚，但是我标记的抗体就是用吸虫ES抗原免疫的，根据我们实验室对此ES抗原的分析，其中最小蛋白分子量为22KD，至于我所使用的抗体能捕获ES中的那个成分不是很清楚啦，师姐毕业了，也没有分析，
所以我推测，抗原不是半抗原，加入时半抗原的话，我用该如何做呢？谢谢你的指导！！！
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多一份快乐少一分烦恼！
3楼2012-08-28 15:39:22
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华俊

金虫 (小有名气)
效价是1:10000以上
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多一份快乐少一分烦恼！
4楼2012-08-28 15:43:00
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