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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » takara 的CIAP去磷酸化处理可靠吗
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baihua1990

木虫 (小有名气)

[求助] takara 的CIAP去磷酸化处理可靠吗

我使用TAKARA 的CIAP对sal1单酶切的VR1012质粒去磷酸化处理，处理完之后使用的PCR清洁试剂盒回收，然后和一个外源的4500bp的目的片段连接（质粒4915bp），对照组（只有去磷酸化处理的VR，无目的片段）有许多自连的单克隆。实验组跳了几十个单克隆验证 也都是自连的。
    是不是酶有问题？用清洁试剂盒回收而不是按照说明书上的酚，氯仿，异戊醇抽提不会有影响吧？
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1楼 2012-08-25 16:24:51
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xiayu511

铜虫 (初入文坛)
我经常用这个酶，并且也是用PCR清洁回收试剂盒回收载体或目的片段，结果一直都不错。
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2楼2012-08-26 11:20:09
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我不是稻草人

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

不一定是CIAP的问题，Sal I没cut好也是有可能的。

单酶切然后连接，是吗？这样你没法保证连入片段的方向吧，为何不尝试双酶切，或者用Sfi I这种可以设计不同酶切位点的酶？

PS：我一般用NEB的CIAP，takara的酶应该也没问题。
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我不是稻草人
3楼2012-09-06 16:34:15
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