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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 检验果糖脱氢酶的活性
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fireflydx

铜虫 (小有名气)

[求助] 检验果糖脱氢酶的活性

各位虫友，本人从sigma买的果糖脱氢酶，酶刚到的时候箱子有点破损，然后用缓冲液配成溶液并保存在-60度条件下，然后做实验，发现结果和理论上的总是不一样，怀疑是不是酶出现了问题，想检验一下酶的活性，不知道怎样检测。谢谢了，因为急需做实验，希望各位积极发表自己的观点，给小女子一些帮助~~
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1楼 2012-08-22 09:53:19
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HarveyWang

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海外行者

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
fireflydx: 金币+3 2012-08-22 11:41:37
zhang8826857: 金币+3, 鼓励应助 2012-08-22 16:08:26
1.保存温度问题。 是不是应该4°C冰箱保存啊？一般的酶Sigma是用高浓度的硫酸铵溶液来保存的。在冰箱里放可以半年呢。

2.一开始就应该分装，而不是用你配的缓冲液去保存啊。

3.你自己保存的过程中，酶失活很正常。要根据自己测定的酶活重新决定添加量的多少。
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
2楼2012-08-22 10:06:44
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HarveyWang

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【答案】应助回帖

楼主，你的是果糖脱氢酶？
还是果糖-6-磷酸 脱氢酶？你要说清楚。我怀疑是后者吧。
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
3楼2012-08-22 10:09:51
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fireflydx

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by HarveyWang at 2012-08-22 10:09:51
楼主，你的是果糖脱氢酶？
还是果糖-6-磷酸 脱氢酶？你要说清楚。我怀疑是后者吧。

是果糖脱氢酶，D-Fructose dehydrogenase
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4楼2012-08-22 11:38:34
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fireflydx

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by HarveyWang at 2012-08-22 10:06:44
1.保存温度问题。 是不是应该4°C冰箱保存啊？一般的酶Sigma是用高浓度的硫酸铵溶液来保存的。在冰箱里放可以半年呢。

2.一开始就应该分装，而不是用你配的缓冲液去保存啊。

3.你自己保存的过程中，酶失活很正 ...

之前做过一次，用之前保存在-60度，用的时候就保存在4度，一周内不会有什么问题。   “分装”是用硫酸铵溶解后再分装吗？
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5楼2012-08-22 11:41:11
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HarveyWang

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
zhang8826857: 金币+3, 鼓励应助 2012-08-22 16:08:41
fireflydx: 金币+1, ★有帮助 2012-08-23 08:49:08
引用回帖:
5楼: Originally posted by fireflydx at 2012-08-22 11:41:11
之前做过一次，用之前保存在-60度，用的时候就保存在4度，一周内不会有什么问题。   “分装”是用硫酸铵溶解后再分装吗？...

很简单，就是将母液直接分装到EP管里哈，按要求保存。用的时候，拿一小支出来即可。

要是这个脱氢酶，反应体系就很好办了。
你的buffer，两个底物果糖和NADP或NAD ，都很便宜。
F --- 》NADP/NAD  生成NADPH/NADH ，检测340nm的升高。

具体数据你得google相关文献啦
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
6楼2012-08-22 12:32:04
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lddmc

木虫 (正式写手)
楼主，你果糖脱氢酶活性检测的时候用的果糖需要处理吗？能不能说下具体步骤啊
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7楼2014-08-14 15:52:23
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