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fireflydx

铜虫 (小有名气)

[求助] 检验果糖脱氢酶的活性

各位虫友,本人从sigma买的果糖脱氢酶,酶刚到的时候箱子有点破损,然后用缓冲液配成溶液并保存在-60度条件下,然后做实验,发现结果和理论上的总是不一样,怀疑是不是酶出现了问题,想检验一下酶的活性,不知道怎样检测。谢谢了,因为急需做实验,希望各位积极发表自己的观点,给小女子一些帮助~~
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HarveyWang

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★ ★ ★ ★ ★ ★
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fireflydx: 金币+3 2012-08-22 11:41:37
zhang8826857: 金币+3, 鼓励应助 2012-08-22 16:08:26
1.保存温度问题。 是不是应该4°C冰箱保存啊?一般的酶Sigma是用高浓度的硫酸铵溶液来保存的。在冰箱里放可以半年呢。

2.一开始就应该分装,而不是用你配的缓冲液去保存啊。

3.你自己保存的过程中,酶失活很正常。要根据自己测定的酶活重新决定添加量的多少。
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
2楼2012-08-22 10:06:44
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HarveyWang

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【答案】应助回帖

楼主,你的是果糖脱氢酶?
还是果糖-6-磷酸 脱氢酶?你要说清楚。我怀疑是后者吧。
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
3楼2012-08-22 10:09:51
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fireflydx

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by HarveyWang at 2012-08-22 10:09:51
楼主,你的是果糖脱氢酶?
还是果糖-6-磷酸 脱氢酶?你要说清楚。我怀疑是后者吧。

是果糖脱氢酶,D-Fructose dehydrogenase
4楼2012-08-22 11:38:34
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fireflydx

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by HarveyWang at 2012-08-22 10:06:44
1.保存温度问题。 是不是应该4°C冰箱保存啊?一般的酶Sigma是用高浓度的硫酸铵溶液来保存的。在冰箱里放可以半年呢。

2.一开始就应该分装,而不是用你配的缓冲液去保存啊。

3.你自己保存的过程中,酶失活很正 ...

之前做过一次,用之前保存在-60度,用的时候就保存在4度,一周内不会有什么问题。   “分装”是用硫酸铵溶解后再分装吗?
5楼2012-08-22 11:41:11
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HarveyWang

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zhang8826857: 金币+3, 鼓励应助 2012-08-22 16:08:41
fireflydx: 金币+1, 有帮助 2012-08-23 08:49:08
引用回帖:
5楼: Originally posted by fireflydx at 2012-08-22 11:41:11
之前做过一次,用之前保存在-60度,用的时候就保存在4度,一周内不会有什么问题。   “分装”是用硫酸铵溶解后再分装吗?...

很简单,就是将母液直接分装到EP管里哈,按要求保存。用的时候,拿一小支出来即可。

要是这个脱氢酶,反应体系就很好办了。
你的buffer,两个底物果糖和NADP或NAD ,都很便宜。
F --- 》NADP/NAD  生成NADPH/NADH ,检测340nm的升高。

具体数据你得google相关文献啦
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
6楼2012-08-22 12:32:04
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lddmc

木虫 (正式写手)

楼主,你果糖脱氢酶活性检测的时候用的果糖需要处理吗?能不能说下具体步骤啊
7楼2014-08-14 15:52:23
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