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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 菌种鉴定的问题
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qiaolinkun

银虫 (小有名气)

[求助] 菌种鉴定的问题

本人刚刚开始做微生物菌种鉴定，把细菌总DNA提取出来后PCR 胶回收 获得纯16SDNA 可以直接测序么？为什么还要转到感受态细胞（一口爱DH5α）里去筛选阳性菌呢？两者测序结果会有多大差异？
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1楼 2012-08-19 11:35:23
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yesucao

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by qiaolinkun at 2012-08-19 20:50:33
我们是送给公司测序的~但我们实验要求是把目的基因转到感受态细胞里培养后筛选出阳性菌再送去检测~~是多此一举？还是更加保险？...

1、如果只是单纯的做16S鉴定的话，都是可以的；要是转了感受态的话，阳性转化子送去测序，之后的东西也没用了；
2、要是克隆构建的话，就要转大肠的感受态了，阳性菌一部分送去测序，一部分提取质粒，用于后期的酶切和连接用。
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7楼2012-08-20 09:53:43
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yesucao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-08-19 20:07:31
qiaolinkun: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-08-20 07:05:38
割胶回收的产物是可以直接拿去测序的，就是在运输的过程中需要加冰袋；要是你们实验室有专门的测序仪的话就不用了啊！
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2楼2012-08-19 20:00:48
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qiaolinkun

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yesucao at 2012-08-19 20:00:48
割胶回收的产物是可以直接拿去测序的，就是在运输的过程中需要加冰袋；要是你们实验室有专门的测序仪的话就不用了啊！

我们是送给公司测序的~但我们实验要求是把目的基因转到感受态细胞里培养后筛选出阳性菌再送去检测~~是多此一举？还是更加保险？
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3楼2012-08-19 20:50:33
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ybfang

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
qiaolinkun: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-08-20 07:05:58
提取DNA后，PCR反应体系：MIX25ul，超纯水21ul，模版2ul，引物8f和1492r各1ul。跑16S。然后取4ul跑电泳看是否明显条带，若比较亮比较清晰，就可以将剩余的PCR未纯化产物拿去测序了。
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共勉！！！！
4楼2012-08-19 23:21:04
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