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qiaolinkun

银虫 (小有名气)

[求助] 菌种鉴定的问题

本人刚刚开始做微生物菌种鉴定,把细菌总DNA提取出来后PCR 胶回收 获得纯16SDNA 可以直接测序么?为什么还要转到感受态细胞(一口爱DH5α)里去筛选阳性菌呢?两者测序结果会有多大差异?
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ybfang

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
qiaolinkun: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-08-20 07:05:58
提取DNA后,PCR反应体系:MIX25ul,超纯水21ul,模版2ul,引物8f和1492r各1ul。跑16S。然后取4ul跑电泳看是否明显条带,若比较亮比较清晰,就可以将剩余的PCR未纯化产物拿去测序了。
共勉!!!!
4楼2012-08-19 23:21:04
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ybfang

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

转到感受态细胞然后筛选是为了检验你的目标基因是否已经连接到载体
共勉!!!!
5楼2012-08-19 23:28:36
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