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qiaolinkun银虫 (小有名气)
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[求助]
菌种鉴定的问题
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| 本人刚刚开始做微生物菌种鉴定，把细菌总DNA提取出来后PCR 胶回收 获得纯16SDNA 可以直接测序么？为什么还要转到感受态细胞（一口爱DH5α）里去筛选阳性菌呢？两者测序结果会有多大差异？ |
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雨伞
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【答案】应助回帖
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zhang8826857: 金币+1, MicEPI+1, lz给了这么高的评价，授予epi一枚 2012-08-22 16:03:09
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zhang8826857: 金币+1, MicEPI+1, lz给了这么高的评价，授予epi一枚 2012-08-22 16:03:09
| 直接和你说吧，测序的原理你自己要弄清楚！找书看吧，测序公司拿回去也是和你做PCR的原理差不多。PCR产物测序易出现双峰，所以你的试剂和PCR操作一定要过关，有杂菌污染测序结果可能就会出问题了，但是，操作过关看一个大概结果也可以将PCR产物直接测序，只是测得的前几十个碱基是不准确的。而做一个克隆就不会出现这些问题，一个载体一般连一个PCR片段，一个转化子只能含有一个这样含目的片段的载体（同种质粒不相容），挑单菌落测序应该测的单一结果的，而且这样测序你用的是载体上的引物测序，而非16S引物，这样得到了完整而准确的16S序列。 |
6楼2012-08-20 00:44:57
yesucao
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