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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DNA凝胶纯化回收问题
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含羞草liu

新虫 (小有名气)

[求助] DNA凝胶纯化回收问题 已有1人参与

大家好！我想对PCR产物进行凝胶纯化回收。买了Takara凝胶回收试剂盒，名为Takara MiniBEST Agrose Gel DNA Extraction Kit Ver 3.0。按照说明书，“分离的DNA片段小于400bp时，应加入终浓度为20%的异丙醇。”但没有指出加入的异丙醇的量呀！具体要加入多少呢？此外，还要求配制3M 醋酸钠（pH 5.2），我是称量61.5g无水乙酸钠，加入200ml的蒸馏水，用乙酸调pH到5.2再定容到250ml。但配好之后要高压灭菌吗？还是直接配好就可以使用？
请有经验的高手帮个忙，谢谢了！
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努力，奋斗，拼搏。。。
1楼 2012-08-11 19:59:46
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王贤卓

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
异丙醇是洗脱作用吧。。那就适量呀！灭菌不重要，DNA提取不是在超净工作台下进行的。我用的试剂盒是Axygen的，这个比较好
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2楼2012-08-12 09:05:11
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-08-13 14:59:22
异丙醇是使核酸富集沉淀，加入异丙醇，能够夺取RNA/DNA周围的水分使其聚集而发生沉淀。但一般要先加入NaCl/NaAc，沉淀前核酸一般带负电，钠离子与之中和，因此消除同性电荷的相斥，更易沉淀核酸。
配置3M盐溶液最好灭菌，虽然是高盐，绝大部分细菌都无法生存在其中，但是自然界还真有耐盐菌哈。不论是否对你的结果有影响，灭个菌是严谨的做法。
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3楼2012-08-13 08:23:19
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木子小钰

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

按照其他试剂盒的说明来看，第一步要称量回收凝胶的重量，对应加入相应体积的异丙醇。例如：称量回收凝胶的重量是100mg，那么对应加入的异丙醇就是100ul。
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4楼2014-09-23 09:37:12
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