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scutphoenix

木虫 (正式写手)

[求助] TA克隆测序结果老是显示空载,这是为什么呢??

一般的TA克隆,挑选白斑,菌落PCR阳性,送测序,结果老是空载,这是为什么呢??谢谢
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13332465896

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by xuyihui2001 at 2012-08-14 16:32:28
如果是菌落PCR容易产生假阳性(你原来连接产物粘在菌落上),所以你要先挑菌落传一次,然后取菌液做PCR.这样不会有假阳性.
     如果是连接不上,考虑你的扩增酶是高保真酶,不能产生非特异的PolyA尾巴.

你好,我想请教一下。我做的菌落PCR也一直出现假阳性,我在出现单菌落后已经转接了一次单菌落到新的抗性平板上,但还是出现假阳性,测序结果还是空载。请问是什么原因造成的呢?
学术与自由
12楼2017-10-12 10:46:47
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robert-RBT

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
PCR阳性,有对照吗,影响PCR结果的因素很多。如果确信是阳性的菌落,不妨提质粒验证一下再测序。
2楼2012-08-10 23:29:50
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scutphoenix

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by robert-RBT at 2012-08-10 23:29:50
PCR阳性,有对照吗,影响PCR结果的因素很多。如果确信是阳性的菌落,不妨提质粒验证一下再测序。

有对照,并且也不是所有的菌落都是阳性的。
因为做的是TA克隆,所以就没提质粒。
有同学也发生类似的现象,换家测序公司居然就解决了,但我想不通是为什么。
当然,我的可能也不是这种情况。
3楼2012-08-11 07:17:56
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scutphoenix

木虫 (正式写手)

提高金币,等待大家的帮助:)
4楼2012-08-12 21:25:42
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