24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2029  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

飘零的叶子

新虫 (小有名气)


[交流] 如何加A尾

我的目的片段在1400bp左右,用了重叠延伸进行PCR,PCR中用的是Primer star,已经P出了目的条带,现在要将其与T载体连接,但是总是加不上A尾。我们是PCR结束以后跑电泳然后进行胶回收又加的A尾,试过了水浴72°30min,PCR仪72°孵育30min,加A尾都不成功,哪位大侠知道是什么原因或者有没有更好的加A尾的体系
回复此楼

» 猜你喜欢

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

云破月来xxz

银虫 (小有名气)



飘零的叶子(金币+1): 谢谢参与
你需要对过程进行分析,比如加入酶的量以及所需的离子浓度等等。还有就是你胶回收后得到的DNA片段是否是完整的,量是不是很多,乙醇残留量等等。总之,优化加尾之前的反应条件后,如果再不出来再考虑你的加A体系。还有,你的T载体,以及感受态之类的是否完好足以保证反应需求,也是你检验是否加了A尾的关键。
8楼2012-07-29 11:51:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

robert-RBT

木虫 (小有名气)


★ ★ ★
飘零的叶子(金币+1): 谢谢参与
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-07-28 22:49:40
不用加A,直接用平端载体连接就可以。或者不回收,直接补加Tag DNA polymerase,72度10-30分钟就可以。
2楼2012-07-28 21:45:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飘零的叶子

新虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by robert-RBT at 2012-07-28 21:45:38
不用加A,直接用平端载体连接就可以。或者不回收,直接补加Tag DNA polymerase,72度10-30分钟就可以。

我们没有平末端载体,一直都是用T载体。如果PCR结束以后直接加Taq酶的话那非特异性扩增的片段不也加上A尾了么?!
3楼2012-07-28 22:14:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

robert-RBT

木虫 (小有名气)


引用回帖:
3楼: Originally posted by 飘零的叶子 at 2012-07-28 22:14:50
我们没有平末端载体,一直都是用T载体。如果PCR结束以后直接加Taq酶的话那非特异性扩增的片段不也加上A尾了么?!...

没关系啊,最后经过切胶回收,即使有非特异性片段,也是少到可以忽略不计的程度。
4楼2012-07-28 23:43:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 286求调剂 +5 丢掉懒惰 2026-03-27 8/400 2026-03-31 11:27 by Delta2012
[考研] 一志愿085600中科院宁波所276分求调剂 +8 材料学257求调剂 2026-03-28 9/450 2026-03-31 10:27 by cal0306
[考研] 一志愿 南京航空航天大学 ,080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-30 5/250 2026-03-31 09:41 by zhshch
[考研] 281求调剂 +5 亚克西good 2026-03-26 7/350 2026-03-30 20:42 by dophin1985
[考研] 考研调剂 +5 Sanmu-124 2026-03-26 5/250 2026-03-30 13:36 by chemdavid
[考研] 求调剂 +10 张zz111 2026-03-27 11/550 2026-03-30 09:17 by 无际的草原
[考研] 一志愿南航 335分 | 0856 | GPA 4.07 | 有科研经历 +8 cccchenso 2026-03-29 8/400 2026-03-29 23:53 by 我是小康
[考研] 总分293求调剂 +8 加一一九 2026-03-25 11/550 2026-03-29 19:53 by 无际的草原
[考研] 一志愿双一流机械285分求调剂 +4 幸运的三木 2026-03-29 5/250 2026-03-29 14:49 by Miko19
[考研] 283求调剂 +3 A child 2026-03-28 3/150 2026-03-28 15:41 by ms629
[考研] 药学105500求调剂 +3 Ssun。。 2026-03-28 3/150 2026-03-28 11:24 by lxf170613
[考研] 308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-27 7/350 2026-03-28 07:43 by 热情沙漠
[考研] 331环境科学与工程求调剂 +3 熠然好运气 2026-03-27 3/150 2026-03-28 04:11 by fmesaito
[考研] 一志愿 西北大学 总分282 英语一62 求调剂 +7 18419759900 2026-03-25 8/400 2026-03-27 16:38 by 18419759900
[考研] 安徽大学专硕生物与医药专业(086000)324分,英语已过四六级,六级521,求调剂 +4 美味可乐鸡翅 2026-03-26 4/200 2026-03-27 15:27 by 星空星月
[考研] 调剂 +3 李嘉图·S·路 2026-03-27 3/150 2026-03-27 11:19 by wangjy2002
[考研] 求调剂 一志愿 本科 北科大 化学 343 +6 13831862839 2026-03-24 7/350 2026-03-26 22:57 by 不吃魚的貓
[考研] 调剂 +4 柚柚yoyo 2026-03-26 4/200 2026-03-26 20:43 by fmesaito
[考研] 材料调剂 5+4 想要一壶桃花水 2026-03-25 10/500 2026-03-26 19:56 by 不吃魚的貓
[考研] 机械学硕总分317求调剂!!!! +4 Acaciad 2026-03-25 4/200 2026-03-25 19:59 by hanserlol
信息提示
请填处理意见