应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 平端 影响连接吗
51/1返回列表
查看: 1492  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

芥末猫

银虫 (小有名气)

[求助] 平端 影响连接吗

本人原核表达载体构建总是连接不上，会不会是因为酶切位点EcoR V的断口是平末端？？？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2012-07-25 14:53:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

芥末猫

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by scutphoenix at 2012-07-25 15:08:47
这个是TA克隆用的那个酶切点啊，不是平末端呀。
另外现在有很多做平末端连接的kit，好像还很适合大片段的。

你好，我想问下，TA克隆用的那个酶切点EcoR V，那我用带有EcoR V酶切位点的引物扩增我的目的片段，再连T载体的话，会不会有影响??
赞一下 回复此楼
7楼2012-07-25 21:46:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

scutphoenix

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流问题。 2012-07-25 20:05:09
这个是TA克隆用的那个酶切点啊，不是平末端呀。
另外现在有很多做平末端连接的kit，好像还很适合大片段的。
赞一下 回复此楼
2楼2012-07-25 15:08:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

polepolar

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
amisking: 回帖置顶 2012-07-25 20:05:12
EcoRV 的断口确实是平末端，相对来说连接效率低一些。你一直连接不上，可以考虑以下几个原因：
1，载体是否酶切完全，载体的用量不要太多，酶切时间要足够。
2，载体和目的片断胶回收后鉴定一下浓度，确定有足够的量。
3，连接体系中载体和目的片断的比例是否合适，通常载体与目的片断的mol比为1:3比较好。
4,感受态细胞的效率是不是足够好。
赞一下 回复此楼
北京普尔普乐生物技术有限公司(www.polepolar.com)
3楼2012-07-25 16:12:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

芥末猫

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by polepolar at 2012-07-25 16:12:24
EcoRV 的断口确实是平末端，相对来说连接效率低一些。你一直连接不上，可以考虑以下几个原因：
1，载体是否酶切完全，载体的用量不要太多，酶切时间要足够。
2，载体和目的片断胶回收后鉴定一下浓度，确定有足够的 ...

那个摩尔比 我按一比十算的 影响会那么大吗？
赞一下 回复此楼
4楼2012-07-25 17:24:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 广西大学材料导师推荐 +3 夏夏夏小正 2026-03-17 5/250 2026-03-21 22:20 by 金昊ML
[考研] 求调剂 +3 13341 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:28 by 学员8dgXkO
[考研] 336求调剂 +5 rmc8866 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:24 by 学员8dgXkO
[考研] 0805材料320求调剂 +3 深海物语 2026-03-20 3/150 2026-03-21 15:46 by 无际的草原
[考研] 求调剂 +3 白QF 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:12 by zhukairuo
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
[考研] 能源材料化学课题组招收硕士研究生8-10名 +5 脱颖而出 2026-03-16 15/750 2026-03-21 10:16 by 脱颖而出
[考研] 材料专业求调剂 +6 hanamiko 2026-03-18 6/300 2026-03-21 00:24 by JourneyLucky
[考研] 295求调剂 +4 一志愿京区211 2026-03-18 6/300 2026-03-20 23:41 by JourneyLucky
[考研] 287求调剂 +7 晨昏线与星海 2026-03-19 8/400 2026-03-20 22:19 by JourneyLucky
[考研] 350求调剂 +5 weudhdk 2026-03-19 5/250 2026-03-20 22:04 by luoyongfeng
[考研] 中南大学化学学硕337求调剂 +3 niko- 2026-03-19 6/300 2026-03-20 21:58 by luoyongfeng
[考研] 一志愿华中农业071010，总分320求调剂 +3 困困困困坤坤 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:38 by 学员8dgXkO
[考研] 材料学求调剂 +4 Stella_Yao 2026-03-20 4/200 2026-03-20 20:28 by ms629
[考研] 材料考研调剂 +3 xwt。 2026-03-19 3/150 2026-03-19 11:22 by w沐阳w
[考研] 0703化学336分求调剂 +6 zbzihdhd 2026-03-15 7/350 2026-03-18 09:53 by zhukairuo
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:12 by ruiyingmiao
[考研] 333求调剂 +3 文思客 2026-03-16 7/350 2026-03-16 18:21 by 文思客
[考研] 070300化学学硕求调剂 +6 太想进步了0608 2026-03-16 6/300 2026-03-16 16:13 by kykm678
[考研] 070303 总分349求调剂 +3 LJY9966 2026-03-15 5/250 2026-03-16 14:24 by xwxstudy
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭