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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 柠檬酸合酶聚集沉淀实验
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landscape37

新虫 (小有名气)

[交流] 柠檬酸合酶聚集沉淀实验

请教：最近在做柠檬酸合酶的聚集实验，买的是sigma的柠檬酸合酶，看资料说是柠檬酸合酶在43度条件下即可聚集沉淀。我做的具体条件是：预热仪器到45度，在Tris盐缓冲液中柠檬酸合酶的终浓度为0.5mM和1mM，取200ul于96孔板，同时以空白缓冲液做好对照（同时为防止加热蒸发浓度改变，我尽可能在样品周围都加了空白缓冲液），置于预热45度的仪器中，在400nm波长下读取40min内的吸光值。看文献上的结果吸光值应该是一个逐渐上升的过程，但是我的结果不是，无论是空白缓冲液还是有柠檬酸合酶的样品在40min中内都是一个值。真讨厌做蛋白实验！真心 败了 疯了
求有经验的高手答疑！
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1楼 2012-07-23 13:27:43
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回帖置顶 ( 共有3个 )

凤凰-涅磐

金虫 (著名写手)
★
landscape37(金币+1): 谢谢参与
越深究一些东西，越感觉自己知道的太少，知识是我们一辈子都学不完的。
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20楼2012-07-24 07:55:23
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mrzouhao

木虫之王 (文坛精英)
★
landscape37(金币+1): 谢谢参与
无论是空白缓冲液还是有柠檬酸合酶的样品在40min中内都是一个值——一定是测定仪器问题
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landscape37
24楼2012-07-24 08:25:16
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landscape37

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
24楼: Originally posted by mrzouhao at 2012-07-24 08:25:16
无论是空白缓冲液还是有柠檬酸合酶的样品在40min中内都是一个值——一定是测定仪器问题

仪器应该没什么问题吧，测蛋白浓度时做BSA标准曲线都挺正常的
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30楼2012-07-24 10:40:09
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sesame_oil

荣誉版主 (文坛精英)
★
landscape37(金币+1): 谢谢参与
这个不知道
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10楼2012-07-23 16:00:00
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landscape37

新虫 (小有名气)

继续等
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12楼2012-07-24 02:42:14
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nicer

至尊木虫 (知名作家)
★
landscape37(金币+1): 谢谢参与
看文献
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16楼2012-07-24 05:40:24
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)
★
landscape37(金币+1): 谢谢参与
blessing
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19楼2012-07-24 07:38:08
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flyxu2楼
2012-07-23 13:46   回复  
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love萌20103楼
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strive1231234楼
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goingabroad5楼
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郑克宁6楼
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zhengkning7楼
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qingheyouyou8楼
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yaoyao1459楼
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假大空11楼
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fengmeiyi13楼
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Scifinder214楼
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wenbin990315楼
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userhung17楼
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lauysche18楼
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ts_chenchao21楼
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20091262222楼
2012-07-24 08:11   回复  
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祝福
zlh80052223楼
2012-07-24 08:16   回复  
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b72925楼
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幸福XXX26楼
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xachenxi27楼
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JimWolverine28楼
2012-07-24 09:23   回复  
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afu2008200829楼
2012-07-24 09:46   回复  
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