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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 柠檬酸合酶聚集沉淀实验
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landscape37

新虫 (小有名气)

[交流] 柠檬酸合酶聚集沉淀实验

请教：最近在做柠檬酸合酶的聚集实验，买的是sigma的柠檬酸合酶，看资料说是柠檬酸合酶在43度条件下即可聚集沉淀。我做的具体条件是：预热仪器到45度，在Tris盐缓冲液中柠檬酸合酶的终浓度为0.5mM和1mM，取200ul于96孔板，同时以空白缓冲液做好对照（同时为防止加热蒸发浓度改变，我尽可能在样品周围都加了空白缓冲液），置于预热45度的仪器中，在400nm波长下读取40min内的吸光值。看文献上的结果吸光值应该是一个逐渐上升的过程，但是我的结果不是，无论是空白缓冲液还是有柠檬酸合酶的样品在40min中内都是一个值。真讨厌做蛋白实验！真心 败了 疯了
求有经验的高手答疑！
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1楼 2012-07-23 13:27:43
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landscape37

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
24楼: Originally posted by mrzouhao at 2012-07-24 08:25:16
无论是空白缓冲液还是有柠檬酸合酶的样品在40min中内都是一个值——一定是测定仪器问题

仪器应该没什么问题吧，测蛋白浓度时做BSA标准曲线都挺正常的
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30楼2012-07-24 10:40:09
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假大空11楼
2012-07-23 16:47   回复  
landscape37(金币+1): 谢谢参与
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