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landscape37

新虫 (小有名气)

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[交流] 柠檬酸合酶聚集沉淀实验

请教：最近在做柠檬酸合酶的聚集实验，买的是sigma的柠檬酸合酶，看资料说是柠檬酸合酶在43度条件下即可聚集沉淀。我做的具体条件是：预热仪器到45度，在Tris盐缓冲液中柠檬酸合酶的终浓度为0.5mM和1mM，取200ul于96孔板，同时以空白缓冲液做好对照（同时为防止加热蒸发浓度改变，我尽可能在样品周围都加了空白缓冲液），置于预热45度的仪器中，在400nm波长下读取40min内的吸光值。看文献上的结果吸光值应该是一个逐渐上升的过程，但是我的结果不是，无论是空白缓冲液还是有柠檬酸合酶的样品在40min中内都是一个值。真讨厌做蛋白实验！真心败了疯了
求有经验的高手答疑！

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1楼 2012-07-23 13:27:43

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sesame_oil

荣誉版主 (文坛精英)

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这个不知道

10楼2012-07-23 16:00:00

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landscape37

新虫 (小有名气)

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继续等

12楼2012-07-24 02:42:14

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nicer

至尊木虫 (知名作家)

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看文献

16楼2012-07-24 05:40:24

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mlanqiang

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blessing

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凤凰-涅磐

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越深究一些东西，越感觉自己知道的太少，知识是我们一辈子都学不完的。

20楼2012-07-24 07:55:23

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mrzouhao

木虫之王 (文坛精英)

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无论是空白缓冲液还是有柠檬酸合酶的样品在40min中内都是一个值——一定是测定仪器问题

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landscape37

24楼2012-07-24 08:25:16

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landscape37

新虫 (小有名气)

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引用回帖:

24楼: Originally posted by mrzouhao at 2012-07-24 08:25:16
无论是空白缓冲液还是有柠檬酸合酶的样品在40min中内都是一个值——一定是测定仪器问题

仪器应该没什么问题吧，测蛋白浓度时做BSA标准曲线都挺正常的

30楼2012-07-24 10:40:09

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flyxu2楼

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strive1231234楼

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goingabroad5楼

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yaoyao1459楼

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假大空11楼

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fengmeiyi13楼

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Scifinder214楼

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wenbin990315楼

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userhung17楼

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lauysche18楼

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20091262222楼

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祝福

zlh80052223楼

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b72925楼

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幸福XXX26楼

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xachenxi27楼

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JimWolverine28楼

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afu2008200829楼

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