应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 3' RACE疑问
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 2378  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

含羞草liu

新虫 (小有名气)

[求助] 3' RACE疑问

我提取了RNA，用设计的兼并引物扩出了目的基因的部分序列，然后根据得到的序列设计特异性引物，进行3’ RACE，使用的是Takara的3’Full RACE Core Set Ver.2.0试剂盒。我共设计了两对引物，分别与试剂盒自带的Outer primer进行Outer PCR时，扩出的条带如图1所示。（其中RNA 1 和RNA 2 是我两次提取的RNA，引物1在扩出的部分序列5’端的50bp处，引物2在扩出部分序列5’端的143bp处）。
之前用兼并引物扩出出部分序列，是用的RNA1 反转录成的cDNA为模板的。 当用RNA1进行3’RACE时， 引物1条带很淡，而引物2进却有两条带，同样对于RNA 2，3’RACE的结果也不相同。我很疑惑，RACE可以出现两条带吗？如果是因为引物特异性不高而出现两条带，为什么不同的RNA的结果又不一样呢？这是引物的问题，还是提取的RNA质量的问题呢？还需要进行Inner PCR反应吗？
请各位帮个忙！不胜感激！！！

图1 3’ RACE电泳结果
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
努力，奋斗，拼搏。。。
1楼 2012-07-20 10:16:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 含羞草liu at 2012-07-21 09:18:44
因为目的序列是未知的，不知道其准确长度，所以，不知道是否是目的条带……...

你可以测一下看看到底是什么序列，你总有个实验目的吧，不知道目的序列有点不对吧
赞一下 回复此楼
4楼2012-07-21 17:39:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有你的目的条带吗？有的话，拿去直接测一下就知道了，如果没有，那就没用，可能要重新做
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

含羞草liu
2楼2012-07-20 11:28:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

含羞草liu

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by jl860822 at 2012-07-20 11:28:56
有你的目的条带吗？有的话，拿去直接测一下就知道了，如果没有，那就没用，可能要重新做

因为目的序列是未知的，不知道其准确长度，所以，不知道是否是目的条带……
赞一下 回复此楼
努力，奋斗，拼搏。。。
3楼2012-07-21 09:18:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

含羞草liu

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jl860822 at 2012-07-21 17:39:43
你可以测一下看看到底是什么序列，你总有个实验目的吧，不知道目的序列有点不对吧...

是这样的，目的序列是未知的，我是根据同源种的序列设计的兼并引物，扩出了一部分序列，再根据这段序列设计特异性引物，进行3’RACE，以扩出其全长。后面还要再进行5’RACE的。因为其准确的序列未知，所以用引物进行RACE扩增时也不知目的条带的长度……
赞一下 回复此楼
努力，奋斗，拼搏。。。
5楼2012-07-21 19:48:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085701环境工程，267求调剂 +9 minht 2026-03-26 9/450 2026-03-27 15:29 by licg0208
[考研] 复试调剂，一志愿南农083200食品科学与工程 +5 XQTJZ 2026-03-26 5/250 2026-03-27 14:49 by 狂炫麦当当
[考研] 求调剂推荐 材料 304 +12 荷包蛋hyj 2026-03-26 12/600 2026-03-27 14:46 by laoshidan
[考研] 考研调剂 +9 小蜡新笔 2026-03-26 9/450 2026-03-27 11:10 by 不吃魚的貓
[考研] 311求调剂 +5 勇敢的小吴 2026-03-20 5/250 2026-03-27 11:07 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿陕师大生物学071000，298分，求调剂 +5 SYA！ 2026-03-23 5/250 2026-03-27 09:29 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿郑州大学，080500学硕，总分317分求调剂 +4 举个栗子oi 2026-03-24 5/250 2026-03-26 23:15 by 不吃魚的貓
[考研] 349求调剂 +4 李木子啊哈哈 2026-03-25 4/200 2026-03-26 22:49 by fmesaito
[考研] 324求调剂 +4 wysyjs25 2026-03-21 4/200 2026-03-26 20:38 by fmesaito
[考研] 340求调剂 +3 Amber00 2026-03-26 3/150 2026-03-26 18:57 by 不吃魚的貓
[考研] 291 求调剂 +7 化工2026届毕业� 2026-03-21 8/400 2026-03-26 11:25 by AlenQIN.
[考研] 303求调剂 +6 蓝山月 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:47 by 418490947
[考研] 332求调剂 +6 032500 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:45 by 418490947
[考研] 生物技术与工程 +3 1294608413 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:02 by 1294608413
[考研] 各位老师您好：本人初试372分 +5 jj涌77 2026-03-25 6/300 2026-03-25 14:15 by mapenggao
[考研] 318求调剂 +3 plum李子 2026-03-23 3/150 2026-03-25 09:42 by 雾散后相遇lc
[考研] 调剂 +4 13853210211 2026-03-24 4/200 2026-03-24 19:44 by ms629
[考研] 293求调剂 +3 涛涛Wjt 2026-03-22 5/250 2026-03-22 22:21 by jiangpengfei
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
[考研] 085601调剂 358分 +3 zzzzggh 2026-03-20 4/200 2026-03-21 10:21 by luoyongfeng
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭