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jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
xingfuxiaoyu: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-07-23 15:44:45
引用回帖:
9楼: Originally posted by xingfuxiaoyu at 2012-07-22 16:14:50
我也不明白Marker的位置怎么会有亮光,这个亮光应该是出现在目的蛋白处的,可为什么MARKER跟一抗结合了,而其余蛋白没有呢?昨天又做了次,MARKER位置是很清晰的条带,其余什么都没有,背景也很干净,真是纠结啊...

我教你,你这样,把你的二抗稀释然后和Marker混合,然后用与底物反应看看有没有荧光!这样试试可能会有效
11楼2012-07-22 19:36:40
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ankang0910

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by xingfuxiaoyu at 2012-07-22 16:16:37
想请教下啊,我一直没搞懂MARKER 怎么可以出来呢?现在老师也老是揪住这个问题。...

的确,理论上marker是不能显影的,因为它不能与你的特异性很强的一抗反应。但marker也是蛋白,也就会存在与IgG抗体结合的可能性。有些公司生产的marker就明确指出可以和各类IgG抗体反应,以达到显影时出现marker条带的目的。如果你的一抗不纯,是多抗,特异性不好,或是反复用过很多次,谁也不敢保证不与marker反应从而显出条带来。所以我才会猜测你的一抗有可能失效了。嘿嘿,以上是我个人的理解,希望可以帮到你。祝实验顺利!!
实验顺利!!
12楼2012-07-23 10:49:38
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xingfuxiaoyu

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
11楼: Originally posted by jl860822 at 2012-07-22 19:36:40
我教你,你这样,把你的二抗稀释然后和Marker混合,然后用与底物反应看看有没有荧光!这样试试可能会有效...

你的意思是如果二抗和MARKER混合后还能曝出来,那就说明marker的荧光不是和一抗结合如果曝不出来,就说明一抗和MARKER 结合了,那就说明是一抗特异性不强。那不管怎么弄,一抗问题比较大是吧?
嘿嘿 你的方法很不错。
13楼2012-07-23 15:54:49
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jl860822

金虫 (正式写手)


引用回帖:
13楼: Originally posted by xingfuxiaoyu at 2012-07-23 15:54:49
你的意思是如果二抗和MARKER混合后还能曝出来,那就说明marker的荧光不是和一抗结合如果曝不出来,就说明一抗和MARKER 结合了,那就说明是一抗特异性不强。那不管怎么弄,一抗问题比较大是吧?
嘿嘿 你的方法很不 ...

对,现在只是排除二抗和底物的问题,自创的方法,做梦梦到的,哈哈
14楼2012-07-23 16:37:19
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xingfuxiaoyu

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
14楼: Originally posted by jl860822 at 2012-07-23 16:37:19
对,现在只是排除二抗和底物的问题,自创的方法,做梦梦到的,哈哈...

在请教下啊,将ECL染液滴到二抗上,这两个要是没问题的话,肯定会发荧光啊,加了MARKER 肯定不会影响啊?
15楼2012-07-25 21:48:50
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jl860822

金虫 (正式写手)


然后你再单独试一下Marker,看看和底物反应能不能发荧光,估计肯定不行,我估计你中间哪一步可能弄错了,你多试试吧
16楼2012-07-25 22:33:01
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jl860822

金虫 (正式写手)


引用回帖:
15楼: Originally posted by xingfuxiaoyu at 2012-07-25 21:48:50
在请教下啊,将ECL染液滴到二抗上,这两个要是没问题的话,肯定会发荧光啊,加了MARKER 肯定不会影响啊?...

然后你再单独试一下Marker,看看和底物反应能不能发荧光,估计肯定不行,我估计你中间哪一步可能弄错了,你多试试吧
17楼2012-07-25 22:33:38
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