24小时热门版块排行榜    

查看: 5700  |  回复: 16

jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
xingfuxiaoyu: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-07-23 15:44:45
引用回帖:
9楼: Originally posted by xingfuxiaoyu at 2012-07-22 16:14:50
我也不明白Marker的位置怎么会有亮光,这个亮光应该是出现在目的蛋白处的,可为什么MARKER跟一抗结合了,而其余蛋白没有呢?昨天又做了次,MARKER位置是很清晰的条带,其余什么都没有,背景也很干净,真是纠结啊...

我教你,你这样,把你的二抗稀释然后和Marker混合,然后用与底物反应看看有没有荧光!这样试试可能会有效
11楼2012-07-22 19:36:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ankang0910

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by xingfuxiaoyu at 2012-07-22 16:16:37
想请教下啊,我一直没搞懂MARKER 怎么可以出来呢?现在老师也老是揪住这个问题。...

的确,理论上marker是不能显影的,因为它不能与你的特异性很强的一抗反应。但marker也是蛋白,也就会存在与IgG抗体结合的可能性。有些公司生产的marker就明确指出可以和各类IgG抗体反应,以达到显影时出现marker条带的目的。如果你的一抗不纯,是多抗,特异性不好,或是反复用过很多次,谁也不敢保证不与marker反应从而显出条带来。所以我才会猜测你的一抗有可能失效了。嘿嘿,以上是我个人的理解,希望可以帮到你。祝实验顺利!!
实验顺利!!
12楼2012-07-23 10:49:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xingfuxiaoyu

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
11楼: Originally posted by jl860822 at 2012-07-22 19:36:40
我教你,你这样,把你的二抗稀释然后和Marker混合,然后用与底物反应看看有没有荧光!这样试试可能会有效...

你的意思是如果二抗和MARKER混合后还能曝出来,那就说明marker的荧光不是和一抗结合如果曝不出来,就说明一抗和MARKER 结合了,那就说明是一抗特异性不强。那不管怎么弄,一抗问题比较大是吧?
嘿嘿 你的方法很不错。
13楼2012-07-23 15:54:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jl860822

金虫 (正式写手)


引用回帖:
13楼: Originally posted by xingfuxiaoyu at 2012-07-23 15:54:49
你的意思是如果二抗和MARKER混合后还能曝出来,那就说明marker的荧光不是和一抗结合如果曝不出来,就说明一抗和MARKER 结合了,那就说明是一抗特异性不强。那不管怎么弄,一抗问题比较大是吧?
嘿嘿 你的方法很不 ...

对,现在只是排除二抗和底物的问题,自创的方法,做梦梦到的,哈哈
14楼2012-07-23 16:37:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xingfuxiaoyu

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
14楼: Originally posted by jl860822 at 2012-07-23 16:37:19
对,现在只是排除二抗和底物的问题,自创的方法,做梦梦到的,哈哈...

在请教下啊,将ECL染液滴到二抗上,这两个要是没问题的话,肯定会发荧光啊,加了MARKER 肯定不会影响啊?
15楼2012-07-25 21:48:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jl860822

金虫 (正式写手)


然后你再单独试一下Marker,看看和底物反应能不能发荧光,估计肯定不行,我估计你中间哪一步可能弄错了,你多试试吧
16楼2012-07-25 22:33:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jl860822

金虫 (正式写手)


引用回帖:
15楼: Originally posted by xingfuxiaoyu at 2012-07-25 21:48:50
在请教下啊,将ECL染液滴到二抗上,这两个要是没问题的话,肯定会发荧光啊,加了MARKER 肯定不会影响啊?...

然后你再单独试一下Marker,看看和底物反应能不能发荧光,估计肯定不行,我估计你中间哪一步可能弄错了,你多试试吧
17楼2012-07-25 22:33:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xingfuxiaoyu 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 什么时候开奖? +4 CrisMessi 2026-08-18 4/200 2026-08-19 00:53 by gatelove
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 27/1350 2026-08-18 21:44 by Noways
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +3 瞬息宇宙 2026-08-15 3/150 2026-08-18 21:40 by xiaohuixin
[基金申请] 朋友圈看到的 +4 wangzilk 2026-08-18 5/250 2026-08-18 19:25 by wangzilk
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +51 医学老男孩 2026-08-13 110/5500 2026-08-18 19:07 by icerianxia
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +8 基诺咪客 2026-08-17 11/550 2026-08-18 17:13 by 悠然熊猫
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +9 yuleib84 2026-08-18 10/500 2026-08-18 16:52 by archvillain
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
信息提示
请填处理意见