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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 光谱分析 » 【求助】紫外分光光度计测定，这样的情况如何确定最佳吸收波长呢？谢谢
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lijun31823

木虫 (小有名气)

[求助] 【求助】紫外分光光度计测定，这样的情况如何确定最佳吸收波长呢？谢谢

昨天重新测了，没有自动扫描的，手动测。没有最大吸收波长，只有最低的，而且数据波动很大。
波长        A
200        0.917
205        0.908
210        0.717
215        0.511
220        0.345
225        0.217
230        0.13
235        0.078
240        0.048
245        0.033
250        0.028
255        0.028
260        0.035
270        0.028
280        0.03
290        0.022
300        0.025
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1楼2012-07-19 08:16:54
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wddmq

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
lijun31823: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-07-19 09:34:13
选择检测波长一般选择吸收曲线上斜率小的地方，如峰顶或峰谷，这样略微的仪器偏差不会造成太大的影响；
另外因为检测的吸收度要适中，如果样品溶液浓度很大又不想要稀释，可以选择吸收小一点的波长处（或者用薄一点的比色皿）；同理，如果浓度本身就很小就不能选择吸收很弱的波长。
在检测波长避免有别的物质的干扰，特别是紫外检测，即溶剂或是溶液中的其它成分在此波长下无吸收或是吸收较弱。
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2楼2012-07-19 09:18:30
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wddmq

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
soundhorizo: 金币+3, 专家辛苦 ^^ 2012-07-19 10:56:09
像你给出的这组数据，200nm处及245之后都较为平坦，但前者估计其它物质干扰很大，后面的吸收又太弱。有点麻烦
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1234
3楼2012-07-19 09:28:13
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lijun31823

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wddmq at 2012-07-19 09:18:30
选择检测波长一般选择吸收曲线上斜率小的地方，如峰顶或峰谷，这样略微的仪器偏差不会造成太大的影响；
另外因为检测的吸收度要适中，如果样品溶液浓度很大又不想要稀释，可以选择吸收小一点的波长处（或者用薄一点 ...

吸光度不是说控制在0.2~0.8比较好吗，我测的数值怎么都那么小呢，溶液浓度需要怎么控制才好，我做的是I+G测定，参比是0.01mol/L HCL溶液。
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4楼2012-07-19 09:29:51
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lijun31823

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wddmq at 2012-07-19 09:28:13
像你给出的这组数据，200nm处及245之后都较为平坦，但前者估计其它物质干扰很大，后面的吸收又太弱。有点麻烦

重复做了几次了，都是这样的趋势，只有一台752紫外可见分光光度计，比色皿没问题。
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5楼2012-07-19 09:31:01
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wddmq

木虫 (正式写手)
这个趋势和你操作没关系，是你的样品本身性质决定的。吸收在0.2~0.8确实比较好，就是这一段的斜率有点大，仪器影响估计会比较大。要不你选定这之间的一个波长，做一下加样回收率和中间精密度，看看结果如何，如果没问题的话，就可以用。
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1234
6楼2012-07-19 11:44:06
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lijun31823

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wddmq at 2012-07-19 11:44:06
这个趋势和你操作没关系，是你的样品本身性质决定的。吸收在0.2~0.8确实比较好，就是这一段的斜率有点大，仪器影响估计会比较大。要不你选定这之间的一个波长，做一下加样回收率和中间精密度，看看结果如何，如果没 ...

加样回收率和中间精密度 是怎么做的呢？
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7楼2012-07-19 12:54:11
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wddmq

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by lijun31823 at 2012-07-19 12:54:11
加样回收率和中间精密度 是怎么做的呢？...

就和方法验证里要做的一样，因为你要是选了这个波长也得做方法验证。方法验证的做法可以参见药典附录和ICH。你那要是没有可以在小木虫上下到。你可以先看看
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1234
8楼2012-07-19 13:36:27
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lijun31823

木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by wddmq at 2012-07-19 13:36:27
就和方法验证里要做的一样，因为你要是选了这个波长也得做方法验证。方法验证的做法可以参见药典附录和ICH。你那要是没有可以在小木虫上下到。你可以先看看...

今天做的 增加了浓度之后测定的。能不能帮我分析下。
我现在不确定的是1、这个物质能不能用来做标准曲线；
                2、最佳吸收波长怎么确定？任意浓度下 进行不同波长的吸光度测定吗？
                3、怎么判断仪器有没有问题？
波长        A
200        1.41
210        1.938
220        1.885
225        1.179
230        0.67
235        0.415
240        0.318
245        0.288
250        0.277
255        0.261
260        0.241
265        0.226
270        0.213
275        0.205
280        0.188
285        0.167
290        0.15
300        0.118
330        0.09
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9楼2012-07-19 14:17:21
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wddmq

木虫 (正式写手)
1.你还有其它可以作对照品的么？
2.最佳波长一般就是选最大吸收，但为了避免其它物质的干扰，也会选择其它波长。用不着用那么多不同的浓度进行不同波长的吸光度测定。首先你的确定你的检测浓度，然后在这个浓度下选择波长。你要是自己拿不准，给你个建议，查些同品种的文献，看人家是用什么波长测的。
3.我这说的仪器的影响，不是仪器有问题，而是其它一些正常的偏差，比如说紫外灯预热时间、灯的能量大小、温度等等。
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10楼2012-07-19 15:32:53
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