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舒克8265

金虫 (著名写手)

[求助] 请教细菌细胞融合技术

请问有童鞋做过枯草芽孢杆菌和其他细菌菌体融合的研究吗?要做的话,一般研究所需要什么样的实验条件?先谢谢啦。
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sicecream

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
实验设备很简单,一般简单的超净台、离心机、水浴锅、显微镜就可以了
至于再生培养基的话,可以试试直接加0.6M氯化钠或0.5M蔗糖,要是长的不好也可以优化下再生培养基,营养丰富点就好,再就是酶种类、酶浓度、酶解时间的选择,灭活方式以及灭活条件的选择,融合方法的选择,融合条件的选择等,还有在去壁后离心转速切记不要太高
9楼2012-07-20 13:37:00
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安静听

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
舒克8265: 金币+10 2012-07-18 20:55:35
w我在做,不过还在摸索去壁条件,实验条件挺简单的:显微镜、超净台、离心机。反正我在用的主要也就这么几样吧
2楼2012-07-18 15:40:39
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松松一号

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
rainwander: 金币+5, MicEPI+1, 鼓励交流 2012-07-18 17:52:44
舒克8265: 金币+20, ★★★很有帮助 2012-07-18 20:55:28
这个是要做菌体去壁之后的原生质体融合是吧,我之前刚做过真菌的原生质体融合,这里可以给你说一些,你参考一下:
1. 无菌操作,需要在超净台中进行,所用的镊子、离心管什么的需要灭菌;
2.原生质体尽量减少保存时间,一般最多在4℃冰箱放1天;
3.需要比较好的显微镜,因为原生质体比较小,要么染色观察,如果不好染色就一般需要相差显微镜观察;
4.需要离心机,对于参考文献上的转速要考证对待,需要摸索一下最佳的转速;
5.需要血球计数板进行计数;
6.对于融合的方法需要探究。
7.去壁条件一般用酶解法,可以选择融壁酶等。
8.再生培养基一定要营养丰富。。

希望对你有所帮助哈。。
try try ! Day Day comfortable……
3楼2012-07-18 17:06:04
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舒克8265

金虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 松松一号 at 2012-07-18 17:06:04
这个是要做菌体去壁之后的原生质体融合是吧,我之前刚做过真菌的原生质体融合,这里可以给你说一些,你参考一下:
1. 无菌操作,需要在超净台中进行,所用的镊子、离心管什么的需要灭菌;
2.原生质体尽量减少保存 ...

可否不用显微镜观察?
4楼2012-07-18 21:17:16
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