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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 请教细菌细胞融合技术
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舒克8265

金虫 (著名写手)

[求助] 请教细菌细胞融合技术

请问有童鞋做过枯草芽孢杆菌和其他细菌菌体融合的研究吗？要做的话，一般研究所需要什么样的实验条件？先谢谢啦。
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1楼 2012-07-18 06:16:54
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安静听

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
舒克8265: 金币+10 2012-07-18 20:55:35
w我在做，不过还在摸索去壁条件，实验条件挺简单的：显微镜、超净台、离心机。反正我在用的主要也就这么几样吧
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2楼2012-07-18 15:40:39
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松松一号

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
rainwander: 金币+5, MicEPI+1, 鼓励交流 2012-07-18 17:52:44
舒克8265: 金币+20, ★★★很有帮助 2012-07-18 20:55:28
这个是要做菌体去壁之后的原生质体融合是吧，我之前刚做过真菌的原生质体融合，这里可以给你说一些，你参考一下：
1. 无菌操作，需要在超净台中进行，所用的镊子、离心管什么的需要灭菌；
2.原生质体尽量减少保存时间，一般最多在4℃冰箱放1天；
3.需要比较好的显微镜，因为原生质体比较小，要么染色观察，如果不好染色就一般需要相差显微镜观察；
4.需要离心机，对于参考文献上的转速要考证对待，需要摸索一下最佳的转速；
5.需要血球计数板进行计数；
6.对于融合的方法需要探究。
7.去壁条件一般用酶解法，可以选择融壁酶等。
8.再生培养基一定要营养丰富。。

希望对你有所帮助哈。。
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3楼2012-07-18 17:06:04
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舒克8265

金虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 松松一号 at 2012-07-18 17:06:04
这个是要做菌体去壁之后的原生质体融合是吧，我之前刚做过真菌的原生质体融合，这里可以给你说一些，你参考一下：
1. 无菌操作，需要在超净台中进行，所用的镊子、离心管什么的需要灭菌；
2.原生质体尽量减少保存 ...

可否不用显微镜观察？
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4楼2012-07-18 21:17:16
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舒克8265

金虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 松松一号 at 2012-07-18 17:06:04
这个是要做菌体去壁之后的原生质体融合是吧，我之前刚做过真菌的原生质体融合，这里可以给你说一些，你参考一下：
1. 无菌操作，需要在超净台中进行，所用的镊子、离心管什么的需要灭菌；
2.原生质体尽量减少保存 ...

另外，可否将具体步骤发给我？谢谢
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5楼2012-07-18 21:17:38
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松松一号

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 舒克8265 at 2012-07-18 21:17:16
可否不用显微镜观察？...

应该不能吧，不然不好观察去壁的情况，如果不观察倒也是可以直接做，但是参考文献的条件毕竟还是要考究的嘛，实验条件也有一些差异的。还有需要显微镜观察计数的呢。

具体的你多查找几篇参考文献，先按它的步骤进行预实验，然后优化操作就行了。加油啦。
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6楼2012-07-18 21:30:15
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舒克8265

金虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 松松一号 at 2012-07-18 21:30:15
应该不能吧，不然不好观察去壁的情况，如果不观察倒也是可以直接做，但是参考文献的条件毕竟还是要考究的嘛，实验条件也有一些差异的。还有需要显微镜观察计数的呢。

具体的你多查找几篇参考文献，先按它的步骤 ...

哎。我在纯粹的德国分析化学实验室，一大堆LC, GC, MS，各种光谱，就是灭有超净台和显微镜。。。。。
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7楼2012-07-19 05:25:20
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松松一号

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 舒克8265 at 2012-07-19 05:25:20
哎。我在纯粹的德国分析化学实验室，一大堆LC, GC, MS，各种光谱，就是灭有超净台和显微镜。。。。。...

呃，在这个实验室为什么会要你做融合实验的。。？
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8楼2012-07-19 12:56:28
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sicecream

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
实验设备很简单，一般简单的超净台、离心机、水浴锅、显微镜就可以了
至于再生培养基的话，可以试试直接加0.6M氯化钠或0.5M蔗糖，要是长的不好也可以优化下再生培养基，营养丰富点就好，再就是酶种类、酶浓度、酶解时间的选择，灭活方式以及灭活条件的选择，融合方法的选择，融合条件的选择等，还有在去壁后离心转速切记不要太高
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9楼2012-07-20 13:37:00
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