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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 测ROS（活性氧）的样品能否冷冻？
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yajune

铁杆木虫 (职业作家)

[求助] 测ROS（活性氧）的样品能否冷冻？

想用DCFH-DA法测斑马鱼脑组织ROS含量，卖试剂盒的那人说要用新鲜的组织才可以，但是我这样品很多，基本不可能在解剖出样品的当天测，需要冷冻后再测。想问问大家有没有用冷冻后的样本做过？冷冻真的影响很大么？有没有不受冷冻影响的测ROS的试剂盒或方法？跪求做过或了解的大神回答
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1楼 2012-07-13 17:14:04
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

murphyLW

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yqbter: 金币+2, 鼓励发帖！ 2012-07-13 20:46:58
yajune: 金币+2, ★有帮助, 谢谢，你的意思是可以先提出ROS再冷冻？ 2012-07-13 23:43:10
最好将ROS从组织里面提取出来再保存吧，ROS相对来讲还是很不稳定的，最好用新鲜组织做，可以多做几次嘛，没必要一次做完所有样本。
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2楼2012-07-13 19:53:31
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gigiloveu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
yajune: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢你的耐心回答和讲解 2012-08-19 07:54:01
ROS提取出来保存？还真没听说过，个人觉得这种方法坚决坚决不行，首先搞清楚什么是ROS，ROS的存在是非常短暂非常不稳定的，怎么可能提取保存？
看楼主用DCF，肯定是测过氧化氢的，个人觉得必须保证用新鲜材料测，如果你把材料冷藏，你能保证你对ROS的刺激条件不变么？明显不能保证。
还有我觉得，不同的刺激条件对ROS的产生时间是不同的，所以建议楼主先摸清楚最佳时间，我之前做了很多次才摸出来。
别用液氮什么保存，ROS的量绝对会改变，说白了，ROS就是个第二信号分子，且非常不稳定，周期短什么的。
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6楼2012-07-15 17:24:34
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普通回帖

yajune

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
2楼: Originally posted by murphyLW at 2012-07-13 19:53:31
最好将ROS从组织里面提取出来再保存吧，ROS相对来讲还是很不稳定的，最好用新鲜组织做，可以多做几次嘛，没必要一次做完所有样本。

谢谢，我的情况是要解剖数量很多的鱼，这些鱼要在同一天剖，但是剖完肯定没时间当天测ROS，所以基本不可能能用新鲜组织。。。你的意思是我把ROS从组织里提取出来以后保存会比较稳定？
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3楼2012-07-13 23:45:17
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yajune: 金币+2, ★有帮助, 谢谢，看来只能再好好安排一下了 2012-07-14 11:11:30
ROS检测，无论化学分光法还是荧光探针，都应该测定新鲜样品，无论在哪个环节低温保存，都可能影响结果。强烈建议楼主分开安排实验，现取样现做。
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
4楼2012-07-14 00:02:00
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0640409

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用液氮保存吧，应该没问题，液氮冻存细胞都是活的，ROS含量不会改变吧，具体没做过
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5楼2012-07-15 13:40:36
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webmasterone752

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
怎么可以冷冻呢。。。自由基。。。
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7楼2012-07-15 19:01:16
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haiven

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是不可以的。。如果你是测RNA、蛋白、酶活等是没有问题的，但是自由基即使在液氮条件下也应该是有变化的，而这种变化对你的实验结果肯定是致命的。
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走进你，温暖我，迷失于这个世界！
8楼2012-07-16 09:04:38
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gigiloveu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

即使非要冷冻，那也得必须先把探针装载后再冷冻，在保证探针荧光没有淬灭之前拿出来做实验也可以。
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9楼2012-07-16 09:36:38
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e12j

新虫 (小有名气)
请教各位，DCFH-DA用什么溶比较好，使用中有什么要注意的啊？我看说明书说要充气保存，肿么保存啊？
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10楼2012-08-01 09:57:11
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