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yajune

铁杆木虫 (职业作家)

[求助] 测ROS(活性氧)的样品能否冷冻?

想用DCFH-DA法测斑马鱼脑组织ROS含量,卖试剂盒的那人说要用新鲜的组织才可以,但是我这样品很多,基本不可能在解剖出样品的当天测,需要冷冻后再测。想问问大家有没有用冷冻后的样本做过?冷冻真的影响很大么?有没有不受冷冻影响的测ROS的试剂盒或方法?跪求做过或了解的大神回答
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murphyLW

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yqbter: 金币+2, 鼓励发帖! 2012-07-13 20:46:58
yajune: 金币+2, 有帮助, 谢谢,你的意思是可以先提出ROS再冷冻? 2012-07-13 23:43:10
最好将ROS从组织里面提取出来再保存吧,ROS相对来讲还是很不稳定的,最好用新鲜组织做,可以多做几次嘛,没必要一次做完所有样本。
2楼2012-07-13 19:53:31
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gigiloveu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
yajune: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢你的耐心回答和讲解 2012-08-19 07:54:01
ROS提取出来保存?还真没听说过,个人觉得这种方法坚决坚决不行,首先搞清楚什么是ROS,ROS的存在是非常短暂非常不稳定的,怎么可能提取保存?
看楼主用DCF,肯定是测过氧化氢的,个人觉得必须保证用新鲜材料测,如果你把材料冷藏,你能保证你对ROS的刺激条件不变么?明显不能保证。
还有我觉得,不同的刺激条件对ROS的产生时间是不同的,所以建议楼主先摸清楚最佳时间,我之前做了很多次才摸出来。
别用液氮什么保存,ROS的量绝对会改变,说白了,ROS就是个第二信号分子,且非常不稳定,周期短什么的。
6楼2012-07-15 17:24:34
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普通回帖

yajune

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
2楼: Originally posted by murphyLW at 2012-07-13 19:53:31
最好将ROS从组织里面提取出来再保存吧,ROS相对来讲还是很不稳定的,最好用新鲜组织做,可以多做几次嘛,没必要一次做完所有样本。

谢谢,我的情况是要解剖数量很多的鱼,这些鱼要在同一天剖,但是剖完肯定没时间当天测ROS,所以基本不可能能用新鲜组织。。。你的意思是我把ROS从组织里提取出来以后保存会比较稳定?
3楼2012-07-13 23:45:17
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yajune: 金币+2, 有帮助, 谢谢,看来只能再好好安排一下了 2012-07-14 11:11:30
ROS检测,无论化学分光法还是荧光探针,都应该测定新鲜样品,无论在哪个环节低温保存,都可能影响结果。强烈建议楼主分开安排实验,现取样现做。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
4楼2012-07-14 00:02:00
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0640409

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用液氮保存吧,应该没问题,液氮冻存细胞都是活的,ROS含量不会改变吧,具体没做过
5楼2012-07-15 13:40:36
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webmasterone752

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
怎么可以冷冻呢。。。自由基。。。
7楼2012-07-15 19:01:16
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haiven

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该是不可以的。。如果你是测RNA、蛋白、酶活等是没有问题的,但是自由基即使在液氮条件下也应该是有变化的,而这种变化对你的实验结果肯定是致命的。
走进你,温暖我,迷失于这个世界!
8楼2012-07-16 09:04:38
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gigiloveu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

即使非要冷冻,那也得必须先把探针装载后再冷冻,在保证探针荧光没有淬灭之前拿出来做实验也可以。
9楼2012-07-16 09:36:38
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e12j

新虫 (小有名气)

请教各位,DCFH-DA用什么溶比较好,使用中有什么要注意的啊?我看说明书说要充气保存,肿么保存啊?
10楼2012-08-01 09:57:11
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