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flytime1115

铜虫 (初入文坛)

[求助] 表皮细胞传代问题

请问有木有人培养过动物皮肤表皮细胞?怎么传代效果会好一些?我用胰酶消化法传的代,可是细胞死了好多……样品很珍贵,求指点~~
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zwzlysh

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yqbter: 金币+2, 鼓励发帖! 2012-07-12 08:23:27
我养过人的皮肤上角质细胞,用胰酶消化后传代,不会出现细胞死亡的现象啊,你的细胞是不是状态不好啊?
2楼2012-07-11 17:21:05
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flytime1115

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zwzlysh at 2012-07-11 17:21:05
我养过人的皮肤上角质细胞,用胰酶消化后传代,不会出现细胞死亡的现象啊,你的细胞是不是状态不好啊?

我是原代。细胞消化下来就很费劲。你胰酶消化多久啊……
3楼2012-07-11 21:31:18
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angie8610

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我做的事表皮细胞中黑素细胞的培养,用胰酶消化1min做传代,但每次传代后都不再生长,也在寻找原因,细胞原代培养真是麻烦呀,做了快一年了依旧没有进展,祝福lz也祝福自己早日成功!
新手上路,多多关照!
4楼2012-07-12 09:26:00
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rb

木虫 (著名写手)

小笨虫虫

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
胰酶消化根据具体培养状况看,消化时间不等,还是需要通过倒置显微镜来观察的,一般1-5分钟不等的,甚至有时候要放到37度培箱中的;同时你培养基用的是什么?
我知道有些人用这个培基:
F12和DMEM按3∶1 的比例混合,加入10 ng/ ml 表皮生长因子,0. 4 μg/ ml 氢化可的松, 20 %胎牛血清, 100u/ ml青霉素,100 u/ ml 链霉素,0. 4 mg/ ml 谷氨酰胺及0. 5μg/ ml异丙肾。
寝室楼的大爷、大妈都是哲学家,他们每天都在思考人类最根本的三个问题:你是谁?你从哪儿来?要去哪儿?
5楼2012-07-12 10:42:16
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dongxie1982

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
LZ确定其他方面没有问题?比如操作方面、培养基、胰酶消化?最近培养皮肤成纤维细胞,也是消化后更换新培养,状态一直不好,换液两三次,逐渐恢复
6楼2012-07-12 16:52:54
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zwzlysh

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by flytime1115 at 2012-07-11 21:31:18
我是原代。细胞消化下来就很费劲。你胰酶消化多久啊……...

是的,皮肤细胞很难消化,所以消化时间要延长,用不加EDTA的胰酶消化要2-5分钟,要看具体情况了。我一般都是消化成“半贴壁”状态,再用PBS洗一下离心,这样细胞很干净。
7楼2012-07-13 09:05:39
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flytime1115

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by rb at 2012-07-12 10:42:16
胰酶消化根据具体培养状况看,消化时间不等,还是需要通过倒置显微镜来观察的,一般1-5分钟不等的,甚至有时候要放到37度培箱中的;同时你培养基用的是什么?
我知道有些人用这个培基:
F12和DMEM按3∶1 的比例混 ...

谢谢,跟您提供的培养基差不多少,因为氢化可的松还没到,我另加了胰岛素。关键是胰酶消化之后细胞就不长了……
8楼2012-07-13 13:47:35
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flytime1115

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by dongxie1982 at 2012-07-12 16:52:54
LZ确定其他方面没有问题?比如操作方面、培养基、胰酶消化?最近培养皮肤成纤维细胞,也是消化后更换新培养,状态一直不好,换液两三次,逐渐恢复

培养基应该问题不大,就是胰酶消化之后不贴壁。很是tout嗯,皮肤成纤维还好吧
9楼2012-07-13 13:59:00
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flytime1115

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by angie8610 at 2012-07-12 09:26:00
我做的事表皮细胞中黑素细胞的培养,用胰酶消化1min做传代,但每次传代后都不再生长,也在寻找原因,细胞原代培养真是麻烦呀,做了快一年了依旧没有进展,祝福lz也祝福自己早日成功!

3Q~~我消化1min,细胞根本没有什么反应~祝你好运咯
10楼2012-07-13 13:59:57
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