24小时热门版块排行榜    

查看: 1525  |  回复: 10

flytime1115

铜虫 (初入文坛)

[求助] 表皮细胞传代问题

请问有木有人培养过动物皮肤表皮细胞?怎么传代效果会好一些?我用胰酶消化法传的代,可是细胞死了好多……样品很珍贵,求指点~~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zwzlysh

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yqbter: 金币+2, 鼓励发帖! 2012-07-12 08:23:27
我养过人的皮肤上角质细胞,用胰酶消化后传代,不会出现细胞死亡的现象啊,你的细胞是不是状态不好啊?
2楼2012-07-11 17:21:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flytime1115

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zwzlysh at 2012-07-11 17:21:05
我养过人的皮肤上角质细胞,用胰酶消化后传代,不会出现细胞死亡的现象啊,你的细胞是不是状态不好啊?

我是原代。细胞消化下来就很费劲。你胰酶消化多久啊……
3楼2012-07-11 21:31:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

angie8610

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我做的事表皮细胞中黑素细胞的培养,用胰酶消化1min做传代,但每次传代后都不再生长,也在寻找原因,细胞原代培养真是麻烦呀,做了快一年了依旧没有进展,祝福lz也祝福自己早日成功!
新手上路,多多关照!
4楼2012-07-12 09:26:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rb

木虫 (著名写手)

小笨虫虫

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
胰酶消化根据具体培养状况看,消化时间不等,还是需要通过倒置显微镜来观察的,一般1-5分钟不等的,甚至有时候要放到37度培箱中的;同时你培养基用的是什么?
我知道有些人用这个培基:
F12和DMEM按3∶1 的比例混合,加入10 ng/ ml 表皮生长因子,0. 4 μg/ ml 氢化可的松, 20 %胎牛血清, 100u/ ml青霉素,100 u/ ml 链霉素,0. 4 mg/ ml 谷氨酰胺及0. 5μg/ ml异丙肾。
寝室楼的大爷、大妈都是哲学家,他们每天都在思考人类最根本的三个问题:你是谁?你从哪儿来?要去哪儿?
5楼2012-07-12 10:42:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dongxie1982

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
LZ确定其他方面没有问题?比如操作方面、培养基、胰酶消化?最近培养皮肤成纤维细胞,也是消化后更换新培养,状态一直不好,换液两三次,逐渐恢复
6楼2012-07-12 16:52:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zwzlysh

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by flytime1115 at 2012-07-11 21:31:18
我是原代。细胞消化下来就很费劲。你胰酶消化多久啊……...

是的,皮肤细胞很难消化,所以消化时间要延长,用不加EDTA的胰酶消化要2-5分钟,要看具体情况了。我一般都是消化成“半贴壁”状态,再用PBS洗一下离心,这样细胞很干净。
7楼2012-07-13 09:05:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flytime1115

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by rb at 2012-07-12 10:42:16
胰酶消化根据具体培养状况看,消化时间不等,还是需要通过倒置显微镜来观察的,一般1-5分钟不等的,甚至有时候要放到37度培箱中的;同时你培养基用的是什么?
我知道有些人用这个培基:
F12和DMEM按3∶1 的比例混 ...

谢谢,跟您提供的培养基差不多少,因为氢化可的松还没到,我另加了胰岛素。关键是胰酶消化之后细胞就不长了……
8楼2012-07-13 13:47:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flytime1115

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by dongxie1982 at 2012-07-12 16:52:54
LZ确定其他方面没有问题?比如操作方面、培养基、胰酶消化?最近培养皮肤成纤维细胞,也是消化后更换新培养,状态一直不好,换液两三次,逐渐恢复

培养基应该问题不大,就是胰酶消化之后不贴壁。很是tout嗯,皮肤成纤维还好吧
9楼2012-07-13 13:59:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flytime1115

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by angie8610 at 2012-07-12 09:26:00
我做的事表皮细胞中黑素细胞的培养,用胰酶消化1min做传代,但每次传代后都不再生长,也在寻找原因,细胞原代培养真是麻烦呀,做了快一年了依旧没有进展,祝福lz也祝福自己早日成功!

3Q~~我消化1min,细胞根本没有什么反应~祝你好运咯
10楼2012-07-13 13:59:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 flytime1115 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 070300化学求调剂 +3 苑豆豆 2026-03-20 3/150 2026-03-22 14:48 by ColorlessPI
[考研] 一志愿东华大学化学070300,求调剂 +5 2117205181 2026-03-21 6/300 2026-03-22 14:18 by ColorlessPI
[考研] 318求调剂 +4 plum李子 2026-03-21 7/350 2026-03-22 14:17 by ColorlessPI
[考研] 一志愿武理材料工程348求调剂 +3  ̄^ ̄゜汗 2026-03-19 5/250 2026-03-22 14:03 by  ̄^ ̄゜汗
[考研] 求调剂 +7 Auroracx 2026-03-22 7/350 2026-03-22 12:38 by 素颜倾城1988
[考研] 一志愿南大,0703化学,分数336,求调剂 +3 收到VS 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:42 by 学员8dgXkO
[考研] 297求调剂 +3 喜欢还是不甘心 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:33 by 学员8dgXkO
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-18 3/150 2026-03-21 17:31 by ColorlessPI
[考研] 296求调剂 +4 www_q 2026-03-20 4/200 2026-03-21 17:26 by 学员8dgXkO
[考研] 306求0703调剂一志愿华中师范 +5 纸鱼ly 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:11 by 学员8dgXkO
[考研] 299求调剂 +5 shxchem 2026-03-20 7/350 2026-03-21 17:09 by ColorlessPI
[考研] 一志愿 西北大学 ,070300化学学硕,总分287,双非一本,求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:46 by JourneyLucky
[考研] 求调剂,一志愿:南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕,总分289分 +4 @taotao 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:14 by JourneyLucky
[考研] 药学383 求调剂 +3 药学chy 2026-03-15 5/250 2026-03-20 22:11 by 云游重阳
[考研] 295材料求调剂,一志愿武汉理工085601专硕 +5 Charlieyq 2026-03-19 5/250 2026-03-20 20:35 by JourneyLucky
[考研] 353求调剂 +3 拉钩不许变 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:56 by JourneyLucky
[考研] 319求调剂 +3 小力气珂珂 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:47 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 eation27 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:32 by JourneyLucky
[考研] 085600材料与化工调剂 324分 +10 llllkkkhh 2026-03-18 12/600 2026-03-19 14:33 by llllkkkhh
[考研] 070303 总分349求调剂 +3 LJY9966 2026-03-15 5/250 2026-03-16 14:24 by xwxstudy
信息提示
请填处理意见