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greatwall201

铜虫 (小有名气)

[求助] 求助亚硝酸还原酶测定方法

求助亚硝酸还原酶测定方法
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yxx_sari

新虫 (初入文坛)

我看了有文献写测定方法,但是文献里总共测了三个酶HAO、Nar、Nir,但是测定方法就一个,我不知道是怎么区分这几个酶活的,计算方法是怎样的啊?
8楼2015-01-04 22:06:32
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greatwall201

铜虫 (小有名气)

非常感谢您的支持
2楼2012-07-08 17:00:37
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和文水

新虫 (初入文坛)

你好,我最近也准备做亚硝酸还原酶的测定。以前没坐过,想和你探讨一下……你做怎么样了,现在
3楼2012-07-09 16:45:00
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greatwall201

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 和文水 at 2012-07-09 16:45:00
你好,我最近也准备做亚硝酸还原酶的测定。以前没坐过,想和你探讨一下……你做怎么样了,现在

NiR 活性分析按照 Rao 等(1981)方法,由亚硝酸的用量决定。反应最终体积为 1.35mL,其中包括:1mL 100mM钾-磷酸缓冲液,pH 7.5,0.05 mL 10 mM 的KNO2,0.05 mL 甲基紫精(15mg/mL 的钾-磷酸缓冲液);蒸馏水 0.05 mL;最后加酶提取物 0.15 mL。反应通过加 0.05 mL 连二亚硫酸钠盐启动(50 mg/mL),在 25℃下反应 30 分钟后,至甲基紫精颜色消失,取 0.2mL 反应液用蒸馏水快速稀释到 6.7mL,加入用 3N  HC1 配置的 10% (w/v)磺胺 1.8 mL和 1% (w/v)盐酸萘乙二胺 1.5mL。在加入这些二氮偶合试剂 15 分钟后,测定 540 nm 吸光率。亚硝酸的量通过亚硝酸标准曲线计算。
4楼2012-07-10 10:09:35
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