| 查看: 2863 | 回复: 9 | |||
| 本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看 | |||
[求助]
Q柱堵了，该怎么样清洗
|
|||
| 大家好，我最近用Q柱纯化蛋白，刚开始上样时没有问题，用完用Nacl洗时刚开始也没什么问题，可是过完20%乙醇后开始有点堵，后来用了2次后，Q柱开始非常堵，上样都没办法进行，各位大侠支支招，什么清洗方法比较好？急用，先行谢过哈 O(∩_∩)O~ |
回复此楼» 猜你喜欢
估计是周四
已经有3人回复
-
基金啊基金
已经有3人回复
-
科研孤儿太难了
已经有15人回复
-
让我中一个面上吧！
已经有10人回复
-
言之凿凿，明天官网会通知放榜？
已经有17人回复
-
时间戳又变了
已经有17人回复
-
今天系统多次维护，明天很可能放榜！
已经有11人回复
-
时间戳变了，能看出什么问题？
已经有23人回复
-
只有每年这种时候来逛逛小木虫
已经有22人回复
-
放榜前的不淡定
已经有12人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 柱子堵了可以用0.05M的稀硫酸冲吗？
已经有5人回复
- 液相滤头堵了，该怎么清洗呢？
已经有17人回复
- FPLC蛋白纯化堵柱子？
已经有24人回复
- UPLC 柱子堵塞
已经有34人回复
- ODS柱子堵了，怎么冲啊？
已经有12人回复
- 色谱柱堵，求如何冲柱
已经有14人回复
- 柱层析用的柱子的塞板堵住了，该怎样来清洗
已经有17人回复
- 色谱柱堵了 应该怎么处理？甲醇冲压力就特别大
已经有5人回复
- 【求助】关于高效液相柱子堵塞的问题 急急急！！！！！！
已经有16人回复
- 【求助】tosoh TSKgel G4000PWxl柱堵住了该怎么清洗
已经有8人回复
- 【求助】液相柱堵了怎么办
已经有21人回复
冼亮淀粉酶
专家顾问 (知名作家)
生物大分子降解酶
-
专家经验: +248 - BioEPI: 73
- 应助: 257 (大学生)
- 贵宾: 0.272
- 金币: 19803.2
- 散金: 1704
- 红花: 121
- 帖子: 6619
- 在线: 2793.8小时
- 虫号: 856414
- 注册: 2009-09-25
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
- 管辖: 微生物
2楼2012-07-04 21:54:09
dshlove
木虫 (正式写手)
- BioEPI: 9
- 应助: 237 (大学生)
- 金币: 4764.7
- 散金: 20
- 红花: 10
- 帖子: 852
- 在线: 419.2小时
- 虫号: 1609389
- 注册: 2012-02-10
- 性别: GG
- 专业: 污染控制化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
看天: 金币+3, BioEPI+1, 授予 2012-07-05 13:39:25
感谢参与，应助指数 +1
看天: 金币+3, BioEPI+1, 授予 2012-07-05 13:39:25
|
首先得确定你i是什么东西堵住了，按照你的介绍来看，很有可能是蛋白堵柱子了。给你个清洗方案，参考下。 1． 日常清洗 每次使用后，先用2 – 5 个柱体积的100% B（其中需含1M盐如NaCl）清洗柱子，再用纯水平衡柱子3 – 5柱个体积。 2． 每月清洗（使用10次左右，柱子的压力上升，分辨率下降时） 0.3M NaOH 充满一个柱体积，室温放置3-5个小时，再用纯水平衡3-5个柱体积。 3． 季度清洗（每月保养进行了3次左右，且按照每月保养操作后效果不明显时） Inject 2 ml 1 M NaCl溶液，用纯水冲洗5个体积直至UV冲平. Inject 2 ml 1 M NaOH溶液，用纯水冲洗5个体积直至UV冲平 Inject 2 ml 1 M NaCl溶液，用纯水冲洗5个体积直至UV冲平 Inject 2 ml 1 M HCl溶液，用纯水冲洗5个体积直至UV冲平 Inject 2 ml 75% 乙酸，用纯水冲洗5个体积直至UV冲平 Inject 5 ml 1 M NaCl溶液，用纯水冲洗5个体积直至UV冲平 4.强力清洗（半年或一年） ⑴.亲水性蛋白和多肽 用溶有去污剂的溶液（例：含0.2%Triton的缓冲液）以较慢的流速过夜清洗柱子，用纯水冲净 用1M NaOH 流速0.8 ml/min 过夜清洗，用纯水冲净，再用2M NaCl 洗脱杂蛋白，用纯水冲净， 10% DMSO(二甲基亚砜)过夜清洗，用纯水冲净，再用2M NaCl 洗脱杂蛋白，用纯水冲净 30%乙酸 流速0.8ml/min 过夜清洗 如用以上步骤清洗后柱子性能仍然没有恢复，可用50mM Tris pH 7.5，10mM CaCl2， 0.1mg/ml Proteinase K溶液室温过夜或37℃ 1h清洗 ⑵ .核酸 通常用10 mM Tris-HCl,1mM EDTA, pH 8.0 以低流速过夜溶解沉淀的核酸 ①.RNA Inject 一个柱体积的0.5 M NaOH放置1h，用纯水冲净，一个柱体积的3 M KCl清洗，用纯水冲净，inject 40 ml 0.1mg/ml RnaseI 0.1 M NaCl, 50 mM Tris-HCl, pH 7.5,37℃放置2h,用10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0冲净，再用一个柱体积的3 M KCl清洗，用纯水冲净。 ②.DNA Inject一个柱体积的0.5 M HCl放置2h，用纯水冲净，Inject一个柱体积的0.5 M NaOH放置1h，用纯水冲净，一个柱体积的3 M KCl清洗，用纯水冲净，inject 40 ml 0.1mg/ml DnaseI 0.1 M NaCl, 10 mM MgCl2 50 mM Tris-HCl, pH 7.5,37℃放置2h, 用10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0冲净，再用一个柱体积的3 M KCl清洗，用纯水冲净。 ⑷.脂类 在中性或酸性溶液中加入去污剂（例：含0.2%Triton的缓冲液），流速0.8ml/min过夜清洗，然后用100%乙醇洗净去污剂，再用纯水冲净。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
水墨蓝3楼2012-07-05 08:48:40
gelois
金虫 (正式写手)
- 应助: 59 (初中生)
- 金币: 6015.3
- 红花: 2
- 帖子: 375
- 在线: 149.6小时
- 虫号: 1655503
- 注册: 2012-03-01
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
4楼2012-07-05 10:37:18
5楼2012-07-16 10:22:33
6楼2012-07-16 10:26:58
7楼2012-07-16 10:28:59
dshlove
木虫 (正式写手)
- BioEPI: 9
- 应助: 237 (大学生)
- 金币: 4764.7
- 散金: 20
- 红花: 10
- 帖子: 852
- 在线: 419.2小时
- 虫号: 1609389
- 注册: 2012-02-10
- 性别: GG
- 专业: 污染控制化学
8楼2012-07-16 10:47:42
dshlove
木虫 (正式写手)
- BioEPI: 9
- 应助: 237 (大学生)
- 金币: 4764.7
- 散金: 20
- 红花: 10
- 帖子: 852
- 在线: 419.2小时
- 虫号: 1609389
- 注册: 2012-02-10
- 性别: GG
- 专业: 污染控制化学
9楼2012-07-16 10:48:24
10楼2012-07-16 13:09:47
