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Q柱堵了，该怎么样清洗
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| 大家好，我最近用Q柱纯化蛋白，刚开始上样时没有问题，用完用Nacl洗时刚开始也没什么问题，可是过完20%乙醇后开始有点堵，后来用了2次后，Q柱开始非常堵，上样都没办法进行，各位大侠支支招，什么清洗方法比较好？急用，先行谢过哈 O(∩_∩)O~ |
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2楼2012-07-04 21:54:09
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【答案】应助回帖
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首先得确定你i是什么东西堵住了，按照你的介绍来看，很有可能是蛋白堵柱子了。给你个清洗方案，参考下。 1． 日常清洗 每次使用后，先用2 – 5 个柱体积的100% B（其中需含1M盐如NaCl）清洗柱子，再用纯水平衡柱子3 – 5柱个体积。 2． 每月清洗（使用10次左右，柱子的压力上升，分辨率下降时） 0.3M NaOH 充满一个柱体积，室温放置3-5个小时，再用纯水平衡3-5个柱体积。 3． 季度清洗（每月保养进行了3次左右，且按照每月保养操作后效果不明显时） Inject 2 ml 1 M NaCl溶液，用纯水冲洗5个体积直至UV冲平. Inject 2 ml 1 M NaOH溶液，用纯水冲洗5个体积直至UV冲平 Inject 2 ml 1 M NaCl溶液，用纯水冲洗5个体积直至UV冲平 Inject 2 ml 1 M HCl溶液，用纯水冲洗5个体积直至UV冲平 Inject 2 ml 75% 乙酸，用纯水冲洗5个体积直至UV冲平 Inject 5 ml 1 M NaCl溶液，用纯水冲洗5个体积直至UV冲平 4.强力清洗（半年或一年） ⑴.亲水性蛋白和多肽 用溶有去污剂的溶液（例：含0.2%Triton的缓冲液）以较慢的流速过夜清洗柱子，用纯水冲净 用1M NaOH 流速0.8 ml/min 过夜清洗，用纯水冲净，再用2M NaCl 洗脱杂蛋白，用纯水冲净， 10% DMSO(二甲基亚砜)过夜清洗，用纯水冲净，再用2M NaCl 洗脱杂蛋白，用纯水冲净 30%乙酸 流速0.8ml/min 过夜清洗 如用以上步骤清洗后柱子性能仍然没有恢复，可用50mM Tris pH 7.5，10mM CaCl2， 0.1mg/ml Proteinase K溶液室温过夜或37℃ 1h清洗 ⑵ .核酸 通常用10 mM Tris-HCl,1mM EDTA, pH 8.0 以低流速过夜溶解沉淀的核酸 ①.RNA Inject 一个柱体积的0.5 M NaOH放置1h，用纯水冲净，一个柱体积的3 M KCl清洗，用纯水冲净，inject 40 ml 0.1mg/ml RnaseI 0.1 M NaCl, 50 mM Tris-HCl, pH 7.5,37℃放置2h,用10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0冲净，再用一个柱体积的3 M KCl清洗，用纯水冲净。 ②.DNA Inject一个柱体积的0.5 M HCl放置2h，用纯水冲净，Inject一个柱体积的0.5 M NaOH放置1h，用纯水冲净，一个柱体积的3 M KCl清洗，用纯水冲净，inject 40 ml 0.1mg/ml DnaseI 0.1 M NaCl, 10 mM MgCl2 50 mM Tris-HCl, pH 7.5,37℃放置2h, 用10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0冲净，再用一个柱体积的3 M KCl清洗，用纯水冲净。 ⑷.脂类 在中性或酸性溶液中加入去污剂（例：含0.2%Triton的缓冲液），流速0.8ml/min过夜清洗，然后用100%乙醇洗净去污剂，再用纯水冲净。 |
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水墨蓝3楼2012-07-05 08:48:40
gelois
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