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guangmingzhizi

铁虫 (初入文坛)

[交流] 关于Dig RNA 探针标记的问题 已有1人参与

有做 Dig RNA labeling 的吗?roche 的kit.
DIG RNA Labeling Kit (SP6/T7)
RNA labeling with digoxigenin-UTP by in vitro transcription with SP6 and T7 RNA polymerase
说明书里:
Sample Preparation
• Linearize the DNA template by cutting at a restriction enzyme site
downstream from the cloned insert.
• To avoid transcription of undesirable sequences, use a restriction
enzyme that creates 5´ overhangs.

对于内切酶的如何选择,这里强调是要5'突出,我无法理解,请大家给解答下好吗?不胜感激。

此外,标记的RNA探针,说明书里:
The RNA transcripts can be analyzed by agarose gel
electrophoresis (e.g., formaldehyde gels or native
gels) and ethidium bromide staining.
RNA,单链,在我的印象中是不能被EB很好的染色,但文献中,有图有真相。容不得我有丝毫怀疑,这一点,也请大家给解答下。再次感谢。
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yuzhiming

捐助贵宾 (知名作家)

好像是5加帽子。
2楼2012-07-04 00:17:22
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