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关于提取液体样品DNA的问题
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我是新人，在暑假提前到了实验室，然后老板送来一份液体麦精和玉米糖浆的样品，说让我提取一下DNA。我找了一下，发现实验室里没有现成的提取液体物质DNA方法，就先用CTAB法试试。 现在最主要的问题是在放入异丙醇沉淀时，离心后看不到沉淀，硬着头皮往下做结果基本都是提不到东西。请问这种情况应该怎么解决？是不是糖类物质造成了干扰？我把我的实验步骤贴上来，请大家帮我参考下，谢谢。 （1)取3g 液体样品装入 离心管中，加6ml TES、15μL Proteinase K，55℃孵育2h，每15min 涡旋混匀； （2)加2.3ml 5 M 的NaCl 溶液调节盐浓度至1.4 M，加100μL 10％ CTAB， 65℃水浴10 min；12,000rpm离心10min，取上清液至 离心管中。 （3)加入等体积氯仿：异戊醇（24:1），颠倒混匀，4 ℃，12,000rpm离心10min，取上清液至离心管中； （4)加入0.55倍体积的预冷异丙醇，-20 ℃放置30 min；4 ℃，12,000rpm离 心15min，弃异丙醇； （5）（70%乙醇洗2 次）第一次加700μL，轻轻涡旋混匀，4 ℃，12,000rpm离心5min，弃乙醇；第二次加200μL，弃乙醇，4 ℃，12,000rpm离心30秒，用枪头吸取离心管中残留的乙醇； （6）室温晾干，15-30分钟，至无乙醇味。 （7）加100μL ddH2O熔解，-20 ℃冻存待用。 |
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